【求助】登革的空斑实验

本人现在在做登革的蚀斑实验
材料及试剂：
1. 试剂:病毒液，C6/36细胞，DMEM,FBS，2.4%甲基纤维素， 0.8%结晶紫，固定液（4%甲醛）
2. 材料: EP管，24孔板，1ml*头，200ul*头，吸管。
（以上除结晶紫均要求无菌）
3. 试剂配制方法:
1、 2.4%甲基纤维素：2.4g甲基纤维素溶于100ml双蒸水，高压灭菌（121℃，20min）后4℃冰箱放置一周，使其充分溶解， 4℃保存。
2、 4%甲醛（固定剂）：甲醛原液(40%)稀释10倍。
3、 0.8%结晶紫： 4.8g结晶紫，加入600ml双蒸水，磁珠搅拌过夜，分装到50ml离心管，去大颗粒后，重新移到新的离心管中。
4、 细胞维持液：2%胎牛血清+1%双抗+DMEM。
细胞生长液：10%胎牛血清+1%双抗+DMEM。
备注1: 高压好后可以无菌操作下摇一摇瓶子或搅拌一下，放冰箱静置溶解时勿晃动瓶子及搅拌，避免产生气泡。
备注2：因为结晶紫较为难溶，故搅拌后1000-2000rpm，5min-10min以去除大颗粒。
操作步骤：
准备工作
1. 制备单细胞层：将C6/36细胞消化后吹打成细胞悬液，调整细胞浓度至2×10⁵/mL，24孔板，每孔500uL，培养24h形成单细胞层。
2. 病毒稀释：将病毒原液按照10倍梯度稀释成10个样品。
接种病毒
1. 弃上述24孔板内细胞培养液，每孔加病毒液250ul，37℃，5%CO₂孵育2h，阴性对照加250ul维持液。
2. 吸净孔内上清液，每孔加800ul营养甲基纤维素，置于37℃，5%CO2温箱中培养5-7天。每天观察空斑形成情况。
3. 待空斑形成后，吸弃甲基纤维素，再每孔加500ul固定液，室温固定10min，自来水洗两遍
4. 每孔加250ul结晶紫（0.8%），室温放置10min。
5. 弃结晶紫染色液，自来水洗5遍。
6. 镜下或肉眼计数。
备注1：在水龙头上自来水沿着孔壁加入，注意不要让水冲到细胞。
可是做不出来空斑，请高手指教！