【求助】IgG与CD31（内皮细胞标记物）免疫荧光双标染色？
这个帖子发布于 10 年零 26 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我准备做小鼠脑组织IgG与CD31（内皮细胞标记物）免疫荧光双标染色？IgG酶标法免疫组化可以检测到，但与CD31双染时却看不到阳性表达，我的protocal如下，请帮忙看看是不是IgG和CD31二抗滴加是的顺序或时间有问题？
1、抗原修复
2、0.3%triton打孔，PBS洗三次，5min/次。
3、5%BSA封闭1h。
4、CD31（兔源）一抗37度孵育，4度过夜（16h）
5、PBS洗4次，5min/次。
6、IgG（TRITC-羊抗小鼠）和CD31二抗（FITC-羊抗兔）同时用PBS稀释后，滴加在标本上，37度孵育1h.
7、PBS洗6次，5min/次。
8、DAPI染色1min
9、PBS洗三次，5min/次。
10、封片后观察。
1、抗原修复
2、0.3%triton打孔，PBS洗三次，5min/次。
3、5%BSA封闭1h。
4、CD31（兔源）一抗37度孵育，4度过夜（16h）
5、PBS洗4次，5min/次。
6、IgG（TRITC-羊抗小鼠）和CD31二抗（FITC-羊抗兔）同时用PBS稀释后，滴加在标本上，37度孵育1h.
7、PBS洗6次，5min/次。
8、DAPI染色1min
9、PBS洗三次，5min/次。
10、封片后观察。
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