【求助】脑组织冰冻切片

想请教一下各位脑组织冰冻切片是怎么做的？
我的做法是：1、动物断头取出脑组织，入4%多聚甲醛固定6h左右（大鼠的话就过夜），2、固定完毕后蔗糖脱水，20%过夜→30%2-3天（蔗糖用PBS配)，3、脱水完毕加入OCT，放入-20℃或-80℃，4、切片，片厚10-20um，切好的片子室温放1-2h后进行后续实验或放-80℃储存。
我做冰冻切片做得不少，但是就一直有个问题：很多空洞，尤其是做HE染色后看更加明显。并且在做免疫荧光时这些空洞边缘容易出现非特异的染色，很影响图片的质量。