【求助】关于软骨细胞在Ⅰ型胶原蛋白中三维培养的问题【本人新手啊，求大神帮助啊！】

大家好，我的实验是这样：取SD鼠关节软骨做原代细胞培养，待原代长满后传代，传代过程中，取一部分细胞悬液，与Ⅰ型胶原蛋白混合，待胶原凝固后，使得细胞在一个三维环境下生长。学生我尝试了两种胶：1.鼠尾胶原蛋白Ⅰ型（公司：索莱宝；规格：10mg，5mg/ml，溶解于0.006mol/LHAc，无菌）；2.Collagen Ⅰ-3D Geling Kit（公司：ScienCell;规格：Collagen Ⅰfrom rat tail 100mg，Gelling Buffer 10X 5ml）
分别运用这两种胶原制备含细胞的三维胶原，方法均按照说明书，具体如下：
一.鼠尾胶原蛋白Ⅰ型（以配制1.0ml胶原为例）：
1.提前将要用到的*头、5.0mlEP管等高压后放入冰箱（低温在配制胶的过程中有助于保证胶的流动性，胶在室温下很容易凝固）；
2.准备好细胞悬液（高糖DMEM）；
3.取12.0微升NaOH（0.1mol/L）加入5.0mlEP管中，再加入200微升鼠尾胶原蛋白Ⅰ型，立即混匀；
4.加入23微升 10XPBS后混匀；
5.加入760微升细胞悬液后混匀加入96孔板；
6.放入培养箱培养。
这种方法遇到的问题：
1.制备完成后当时镜下观察，细胞均匀散布在液体中，可是第二天观察，会发现每孔中的胶貌似只有局部成胶，而且所有细胞都集中在这部分，其余部分观察不到细胞；
2.细胞不成理想中三维培养形态，形态同二维培养基本一致；
二.Collagen Ⅰ-3D Geling Kit
1.提前将要用到的*头、5.0mlEP管等高压后放入冰箱（低温在配制胶的过程中有助于保证胶的流动性，胶在室温下很容易凝固）；
2.配胶比列为：1份细胞悬液，1分10xBuffer液（试剂盒中给的），8份Collagen Ⅰ，混匀；
3.加入96孔板后放入培养箱培养。
这种方法遇到的问题：
1.制备完成后当时镜下观察，细胞的密度非常非常少，基本找不到。
2.第二天待成胶后观察，胶非常不透亮，观察不清里面的细胞，有的时候基本找不到细胞；
以上这两种方法均是按照说明书来配比的。本人在细胞培养方面是个新手，三维培养就更是不会，自己摸索了一个多月了，始终没有成功，也没有老师和师兄带，真的是焦头烂额啊。以上我尽量描述了我的实验过程和遇到的问题，希望各位老师和同学能帮帮我，如果对我提出的问题有什么需要完善的描述，请留言，我尽量描述。
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