蛋白提取

以6孔板为例

准备足够量的冰

把RIPA Buffer，磷酸酶抑制剂混合液(100x)，PMSF(100mM)放在冰上预冷

将1200ul的RIPA buffer(每个孔200ul)，12ul的PMSF和12ul的磷酸酶抑制剂混合液加入到1.5ml的ep管中充分混合

将6孔板中的培养液倒掉，用PBS洗2遍

每个孔加入200ul左右的混合液

在冰上静置5min

将6孔板放在冰上，用细胞刮将细胞刮下，用枪将细胞转移至ep管中(ep管提前冰上预冷)

注意：

1.细胞刮刮头上也有大量细胞，记得收集

2.每换一个样本，都要把细胞刮刮头在蒸馏水中洗一遍

冰上静置15min

静置后充分震荡

12000rpm，4摄氏度，15min进行离心

将上清液转移到新的预冷ep管中

加入50ul变性buffer（5x）

在100摄氏度煮10min

放入-20度冰箱进行保存