【求助】细胞凋亡的检测

大家好，有一个问题已经困扰我很久了，我的细胞是THP-1悬浮细胞，然后用PMA诱导成贴壁细胞之后，用胰酶消化，然后用Annexin-V和PI双染测凋亡，每次检测细胞死亡率都特别高，基础值（就是细胞只是诱导，不加其他的额外刺激，也有很多死亡的，达50%左右），我用台盼蓝做了一下，发现在诱导之后的上清里，的确死细胞很多，但是用胰酶消化下来的贴壁细胞，死亡率还是很低的。但是有一次，我把上清去掉了，还是有40%左右的凋亡细胞，这我就不明白了，难道台盼蓝和流式做差别有那么大么？我模拟流式的过程，震荡，离心，处了没有用抗体标外，其余都一样，但是台盼蓝染色死亡细胞还是很低。特别想知道原因。