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【求助】siRNA转染后目的基因未被干扰,该怎么办?

放疗科医师 · 最后编辑于 2022-10-09 · IP 江苏江苏
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这个帖子发布于 12 年零 72 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位老师前辈们好!
我刚做实验,第一次做siRNA转染。在公司买了两条siRNA,分别针对不同的靶基因。其中一条序列是在文献中找的,另外一条是公司设计的,公司还附送了通用阴性对照。
为了省钱(虽然很不好意思,但这是主要原因),我没有买带荧光的阴性对照,没有买阳性对照。
现在结果是:
1. 文献中找的siRNA转染后,RT-PCR检测没有被干扰,重复了两次转染,做了N次RT-PCR,都是这结果;但是我检测下游基因,表达倒是有变化,只是跟文献中的变化相反;
2. 公司设计的那条siRNA,通过RT-PCR做下来干扰效果不错,下游基因变化也在预料中。
我真的很想请教一下:
像我现在的情况,我能怎么办呢?应该无法检测转染效率吧,也不晓得是不是转染条件不好,我下游目的基因的变化是不是能间接说明其实siRNA转染后是有物质被干扰的,虽然结果与文献中的相反(与文献用的细胞不同,RT-PCR的引物不同)。
而且我也考虑,会不会是RT-PCR的引物刚好在被干扰的位置同侧,导致无法检测出想要的结果?
感激涕零!!!








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