经验分享 | 大神教你瞬时转染快，准，狠！附流程图
一般情况下，瞬时转染是将 DNA 导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中，重组 DNA 导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。
通过瞬时转染，将目的基因敲降或者过表达（gain and loss 实验），观察下游靶基因的表达情况，或者细胞表型（phenotype）的变化，例如凋亡，周期，增殖，侵袭，转移等。那该怎么做呢？
实验前准备
lipofectamine2000（转染试剂）（避光），Opti-MEMI 减血清培养基（避光），目的基因的质粒或者 siRNA（以 siRNA 为例），细胞，六孔板，培养基，以及一些细胞实验所需的普通物品。
实验步骤详解
细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到 60%~80% 覆盖。
实验常见问答
师兄, 转染为什么不能加抗生素？
答：抗生素, 比如青霉素和链霉素, 一般 对于真核细胞无毒, 但阳离子脂质体试剂（Opti-MEMI）增加了细胞的通透性, 使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性, 导致转染效率低下。所以在转染的时候不允许加入抗生素。
师兄，转不进去怎么办?
有以下几种情况：
1）转染 siRNA 设计的靶点不好，一般情况下公司都是三保一，所以有一些确实存在敲不下来，或者过表达的质粒太长，例如基因长度大于 4000bp 的一般过表达效率不高。
2）这些质粒或者 siRNA 过期了。
3）转染的时间太短，或者 siRNA 或者质粒给的浓度太低，可以延长转染的时间，例如 4-6h 换液，改成 8h 换液。或者加大质粒或者 siRNA 浓度，例如之前给以 5ul，现在可以加 7.5 或者 10ul。
转进去细胞全死了?
48H 提蛋白行不行？
如何看转染效率？
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最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2524
