【求助】求助！慢病毒转导筛选失败，干扰效果不明显，原因在哪？谢谢
这个帖子发布于 12 年零 196 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近实验不顺利，请园友们帮帮想想办法。
以下是实验过程
1，用进口公司的plko.1为载体的慢病毒质粒瞬转细胞后，western验证筛选出有干扰作用的2个质粒A和B（验证了2次）
2，用筛选好的质粒和包装质粒转染293T细胞包装病毒颗粒，病毒上清没有测滴度，仅仅离心过2次后，直接,加入6孔板，每孔加1ml病毒上清和1ml培养液
3，转导两天后将浓度已经筛选好的嘌呤霉素培养液加入杀，加药后3天，未加入病毒上清的空白孔中的细胞全部死亡，有病毒的孔内越有50%细胞还是活的，而且形态无明显改变。
4，嘌呤霉素持续杀14天后，换成普通培养液。
因为载体不带荧光，所以只通过western blot 验证干扰效果，结果一次是干扰组质粒A有效果，B组没有效果，再一次反过来A组没效果，但是质粒B组有，而目前再重复了两次，两组都没有干扰效果了。
实验已经2月，不知道问题出来哪里，加了病毒处理的细胞用嘌呤霉素筛选是没有死亡，我觉得应该是质粒转导进了细胞的结果，但为什么验证不来干扰效果呢？难道是因为我没有挑选单克隆么？请大家帮帮看看，谢谢！！
以下是实验过程
1，用进口公司的plko.1为载体的慢病毒质粒瞬转细胞后，western验证筛选出有干扰作用的2个质粒A和B（验证了2次）
2，用筛选好的质粒和包装质粒转染293T细胞包装病毒颗粒，病毒上清没有测滴度，仅仅离心过2次后，直接,加入6孔板，每孔加1ml病毒上清和1ml培养液
3，转导两天后将浓度已经筛选好的嘌呤霉素培养液加入杀，加药后3天，未加入病毒上清的空白孔中的细胞全部死亡，有病毒的孔内越有50%细胞还是活的，而且形态无明显改变。
4，嘌呤霉素持续杀14天后，换成普通培养液。
因为载体不带荧光，所以只通过western blot 验证干扰效果，结果一次是干扰组质粒A有效果，B组没有效果，再一次反过来A组没效果，但是质粒B组有，而目前再重复了两次，两组都没有干扰效果了。
实验已经2月，不知道问题出来哪里，加了病毒处理的细胞用嘌呤霉素筛选是没有死亡，我觉得应该是质粒转导进了细胞的结果，但为什么验证不来干扰效果呢？难道是因为我没有挑选单克隆么？请大家帮帮看看，谢谢！！
