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【求助】SDS-PAGE电泳,我配的分离胶很快就凝了,浓缩胶总是不凝

最后编辑于 2011-08-29 · IP 江苏江苏
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这个帖子发布于 13 年零 334 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
这是我的配方:
(1) 4×浓缩胶缓冲液: Tris-Cl 6.06 g 10%(W/V)SDS 4 ml去离子水溶解定容至100 ml ,用盐酸调至pH 6.8。
(2) 4×分离胶缓冲液: Tris-C1 18.17 g 10%SDS 4 ml去离子水溶解定容至100 ml,用盐酸调至pH 8.8。
(3)30%聚丙烯酰胺溶液(30%AC):丙烯酰胺 29 g双丙烯酰胺(N,N’-甲叉双丙烯酰胺) l g去离子水溶解并定容至100 ml,滤去不溶物,装入棕色瓶于4℃ 保存。
(4)10%过硫酸铵(AP):称取1克过硫酸铵溶于9ml双蒸水,定容至10ml,分装冻存备用。

配制:
12.5%分离胶:双蒸水 1.62 ml 30%AC 1.95 ml 4×分离胶缓冲液 1.24 ml 10%AP 40μl TEMED 4μl混匀灌制。(AP TEMED实际加倍)
5%浓缩胶:双蒸水 1 ml 30%AC 300 μl 4×浓缩胶胶缓冲液 445 μl 10%AP 30 μl TEMED 5 μl混匀灌制。(AP TEMED 实际多加了好几倍)

AP每次都是新配的,肯定没有问题(溶于水有噼里啪啦的声音),TEMED也新买的,没有问题,缓冲液Ph每次做之前都测一下的,也可以确定没有问题,分离胶为8.8,浓缩胶6.8。TEMED和AP在配分离胶时加倍,配浓缩胶时多加了好几倍进去的。
分离胶放在烘箱里,半小时左右就凝了。可浓缩胶放四五个小时都不凝,液面有些下降,可能是水分蒸掉了一部分吧。但胶仍然是稀稀的液体,已经试了好几次了,都是这个现象。。。请大家看看可能会是什么原因呢,这个问题困扰我一星期了!试剂重新配了几次,还是没解决!真是郁闷那!










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