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【求助】长引物PCR扩增基因组DNA 是否会增加产物特异性?

最后编辑于 2022-10-09 · IP 江苏江苏
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这个帖子发布于 14 年零 110 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
从嗜热菌gDNA中扩增一2100 bp CDS片段,GC含量不到70%。直接从ATG开始取20 base, TAA开始取20 base, 此时TM值皆为63度,然后分别加了酶切位点及保护碱基约10-12 base。60度扩增后全是杂带,从几百到五六千。梯度PCR也做过,不行。现想设计长引物,即从ATG开始取30-50base,TAA开始取30-50 base. 反应时提高退火温度

不知可行否?如此是否可以减少非特异性扩增?

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