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【求助】分子量与分子量分布-检测结果异常求助

发布于 2010-04-06 · 浏览 2158 · IP 山东山东
这个帖子发布于 15 年零 39 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位老师好,
我们公司生产一个品种,其中有一个项目,是分子量与分子量分布。由于第一次做这个项目,没有经验。
原料厂家检验结果和我们差距很大,而且每个批次都这样,因为觉得可能是系统误差,但是又不知如何分析,因此求助,谢谢。
【下面是标准原文】
分子量与分子量分布 照分子排阻色谱法(《中国药典》2005年版二部附录Ⅴ H)测定,重均分子量应小于8000,分子量小于8000的级分不少于总量的60%。
对照品溶液的制备 精密称取欧洲药典低分子量肝素分子量测定用对照品(Mna:3700)适量,用流动相制成每1ml含10mg的溶液。
供试品溶液的制备 取本品适量,加流动相稀释成每1ml约含10mg的溶液。
色谱条件与系统校正 以亲水性键合硅胶为填充剂〔如TSK G2000SWXL(300mm×7.8mm)或相应的可分离15000~100000分子量蛋白质的色谱柱〕:以2.84%无水硫酸钠溶液(用稀硫酸调节pH值至5.0)为流动相;流速为每分钟0.5ml;柱温为35℃;紫外检测器和示差折光检测器以先后次序串联连接色谱柱的出口,准确测量两个检测器的延滞时间以使色谱图对应,检测波长为234nm,取对照品溶液25µl,注入液相色谱仪,记录紫外和示差色谱图,校正保留时间应为示差检测器的时间。由紫外色谱图的总峰面积(∑UV234)和示差色谱图的总峰面积(∑RI)(除去主峰后的盐和溶剂峰)按式(1)计算比值r:再按式(2)计算f值。由校正因子f按式(3)计算示差色谱图上每个时间点的分子量M1:
r=∑RI/∑UV234 (1)
f=Mna/r (2)
Mi=f×RI1/UV234i (3)
式中 Mna 为对照品的数均分子量;
RIi和UV234i 分别为示差和紫外色谱图中各相应时间的峰高。
以保留时间对分子量用GPC软件做系统校正。
测定法 取供试品溶液25µl注入液相色谱仪,记录示差色谱图(保证主峰和溶剂峰能彻底洗脱),按式(4)计算重均分子量:
MW=∑(RIiMi)/∑RIi
式中 RIi 为洗脱的i级分的物质量,即示差色谱图的峰高;















最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2158

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