【求助】载体构建过程中的酶切连接问题
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大家好，我想在转基因的时候把35s启动子换掉，换成我自己基因的启动子。具体有2套方案，一是用1300载体，酶切1300的35s启动子，二是用gateway技术，酶切pb2gw7载体的35s启动子。酶切的时候用的是takara的内切酶，这2个酶可以进行双酶切，37度5小时进行双酶切，酶切的很好，可以清晰的看到1kb多的35s启动子被切下来，回收后也很亮，进行连接的时候用的是neb，takara和promega的连接酶，转化的时候长斑不多，但很像阳性的，但菌液检测没用阳性，提质粒也酶切不开，说明没连上。已经做了好几次了，快一个月了，请大家帮忙分析一下原因，多谢
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