【求助】生物素标记抗体标不上

各位XDJM:
最近生物素标记AFP抗体,老是标不上.我把过程简单介绍一下:
(1)生物素化-ε-氨基己酸-N-羟基丁二酰亚胺活化脂溶液lmg／ml以二甲亚砜(DMSO)制备。
　　(2)将待偶联的抗体溶液用0．1mol／L,pH9．0NaHCO3。配成1—2mg／m1。
　　(3)将BNHS与待偶联抗体(如IgG)按1：8混合，室温搅拌4h。
　　(4)4℃条件下使上述混合液体以0.05mol／L，pH7．2PBS透析过夜一20℃分装存放。
检测方法:
(1)用生物素化AFP包被,然后加酶标羊抗鼠抗体,加TMB显色系统,基本没有信号.
(2)包被AFP一抗,然后加AFP抗原,然后加生物素化AFP和酶标AFP二抗进行竞争反应,加
TMB显色系统,以单加酶标AFP二抗为对照,信号比较无明显差异.
不知道哪出问题了,请高手赐教!:)