我在做HUVEC的自噬，LC3一直跑不好，关于提取该细胞中LC3以及LC3的WB一些问题求助大家
先上图，并且说一下我的实验步骤。 这个还算是好的，能看到两条条带，有时第二条几乎看不到，而拖尾现象基本都是一样很严重。 提蛋白用的凯基生物的全蛋白提取试剂盒（lysis buffer+蛋白酶抑制剂+磷酸酶抑制剂+PMSF） 刮下后涡旋混匀数秒，放入冰内1h，4℃ 1.2W rpm X 15min离心，取上清，测蛋白浓度（BCA法），配平，加loading buffer，瞬时离心+混匀后100℃ 5min变性，冰内冷却后直接跑胶（因为LC3对冻融敏感，所以不敢放-20℃）。12%的胶，上样量在30ug左右，湿转，恒流220mA，60min，膜是PVDF 0.22um孔径，LC3一抗是CST的兔多
