求助：毕赤酵母分泌表达上清过镍柱

各位兄弟姐妹们，最近在做毕赤酵母纯化这一块，我的目的蛋白37kda，等电点为9.2，带his标签，想用镍柱纯化，做过纯化以后，跑胶发现有杂带，而且峰小，蛋白表达量可能是一方面原因，我怀疑是有一部分没挂住，样品处理有问题！
我想问一下，表达上清需要如何处理才能上样，我直接过0.45um膜上样效果不好，还有样品ph会有很大影响吗？需要和洗脱液ph一样吗？我的上清ph是5左右，洗脱液为不同浓度的咪唑！用teis—hcl 8.0和nacl，不同浓度咪唑配制！能不能有人给一个上清处理和纯化的详细方案！谢谢呀！