【求助】western 做了三个月都不出结果！！！！！！！
这个帖子发布于 17 年零 336 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大家好，我的WENSTERN做了好几个月都一直没有结果也找不出来问题在那儿，抗体也换了好几种，就是不出结果。我现在都郁闷死了。
我用的是分子克隆的配方15%的胶，转膜300MA,1.5h,出来用丽春红染色也还能看到清楚的条带，用TBST稀释的8%的牛奶封闭4°C过夜，或者37°C1.5h都不行，然后用一抗37°C 1.5h摇，TBST 洗膜6 min*4。二抗37°C 1h摇，TBST 洗膜 6 min*4。加底物避光反应3min,曝光。用的是显影液，定影液，就是石家庄化工厂的那种配方。
每次都是一张大黑膜，连个影都没有。这个以前用国产的抗体做出来过，肯定能有结果，但是换了一种进口的抗体就总也出来不来了，每天被老板数落这么简单一个WENSTERN问题都解决不了~~
哪位高手帮我分析一下，如果解决了这个问题，我一定请吃大餐！！！
我用的是分子克隆的配方15%的胶，转膜300MA,1.5h,出来用丽春红染色也还能看到清楚的条带，用TBST稀释的8%的牛奶封闭4°C过夜，或者37°C1.5h都不行，然后用一抗37°C 1.5h摇，TBST 洗膜6 min*4。二抗37°C 1h摇，TBST 洗膜 6 min*4。加底物避光反应3min,曝光。用的是显影液，定影液，就是石家庄化工厂的那种配方。
每次都是一张大黑膜，连个影都没有。这个以前用国产的抗体做出来过，肯定能有结果，但是换了一种进口的抗体就总也出来不来了，每天被老板数落这么简单一个WENSTERN问题都解决不了~~
哪位高手帮我分析一下，如果解决了这个问题，我一定请吃大餐！！！
