急！ ELISA阴性对照和实验孔结果无明显差别 请各位帮忙
发布于 2004-02-23 · 浏览 6143 · IP 北京北京
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最近在做ELISA实验。（双抗体夹心测抗原）
第一次分别用Mab和 Pab包被。结果Pab包被的孔全未出结果。老板说是Pab的结合位点和Mab有重合所致。但是结果中阴性对照和实验孔结果无明显差别，OD值在2.0左右。有同事分析可能是包被的抗体浓度太高。（建议浓度为1：64，000,我用了1：8，000），因此，我做了一系列包被浓度，从1：8000、 1：16000、 1：32000、1：64，000、1：96，000。结果显示OD 值随浓度的降低而下降。从1.7左右，到0.9左右。除了1：8000时阴性和阳性相差约0.1-0.2外，其余各浓度均无明显差别。
我每次洗板用手洗，注满后，浸泡5-10分钟，洗5-6次。
现在，我用1：8000 Mab重新包被，想将Pab浓度从1：50（前几次使用浓度）、1：200、1：400、1：800、1：1600系列稀释。另外，我用的二抗是Promega 的antiRabbit，建议稀释为1：2500，我是否有必要按1：5000稀释？
急盼各位高手指点迷津，小女子不胜感激！！！
第一次分别用Mab和 Pab包被。结果Pab包被的孔全未出结果。老板说是Pab的结合位点和Mab有重合所致。但是结果中阴性对照和实验孔结果无明显差别，OD值在2.0左右。有同事分析可能是包被的抗体浓度太高。（建议浓度为1：64，000,我用了1：8，000），因此，我做了一系列包被浓度，从1：8000、 1：16000、 1：32000、1：64，000、1：96，000。结果显示OD 值随浓度的降低而下降。从1.7左右，到0.9左右。除了1：8000时阴性和阳性相差约0.1-0.2外，其余各浓度均无明显差别。
我每次洗板用手洗，注满后，浸泡5-10分钟，洗5-6次。
现在，我用1：8000 Mab重新包被，想将Pab浓度从1：50（前几次使用浓度）、1：200、1：400、1：800、1：1600系列稀释。另外，我用的二抗是Promega 的antiRabbit，建议稀释为1：2500，我是否有必要按1：5000稀释？
急盼各位高手指点迷津，小女子不胜感激！！！
最后编辑于 2004-02-24 · 浏览 6143
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