【讨论】移植细胞的标记追踪技术精华版

移植细胞的标记追踪技术（摘自我的毕业论文，原创）
已有许多基础与临床研究表明，细胞移植，尤其干细胞移植修复受损的心脏是可行的、有效的。而为了深入认识移植的细胞在体内如何实现其修复受损心脏的功能？许多学者建立了几种100%标记效率的细胞标记技术。这里就对各种标记技术的优缺点进行归纳总结。
1.BrdU是用于标记增殖分裂的细胞。其主要优点是BrdU抗体与BrdU反应后显色可即刻显现标记的情况，其缺点细胞分裂时标记强度降低或标记丢失。增殖的细胞逐渐降低细胞BrdU标记。因此，BrdU适用于短期标记移植到心脏的细胞。[57-58]
2.DAPI是一种显现活细胞或固定细胞DNA的荧光染料。没结合DNA的DAPI荧光很弱，而一旦和DNA结合，表现出很强的荧光。并且对细胞相对无毒，不改变细胞的超微结构。DAPI最大的优点就是标记技术简单，而标记效率很高（起初达100%），标记的细胞能清楚的观察到。缺点是细胞分裂将导致DAPI淬灭，以及收缩蛋白或其它蛋白染色所造成的强背景色等将引起标记强度降低。因此DAPI也仅适于短期定量分析。[59-61]
3.PKH26是一种红色荧光染料。能清晰地显现细胞的结构和内含物。标记效率起初达100%，随后逐渐降低，并且在一定时期后将检测不到标记的细胞。
4.pEGFP-N1无论起初还是其后标记细胞的效率最低。同时pEGFP-N1如PKH26等荧光染料一样对细胞有损伤。因此由于其标记效率太低目前已较少应用于细胞移植研究。
5.GFP是从水母体内分离获得的一种发光蛋白，吸收蓝光，发绿光，且不需光发射辅因子。由于GFP在哺乳动物细胞稳定、荧光显微镜又容易检测，因此GFP已是常用的标记分子。Okabe等成功建立GFP转基因鼠。尽管GFP在GFP转基因鼠体内各处组织细胞强表达，但是GFP转基因鼠依然很正常健康。甚至当GFP转基因鼠骨髓细胞（BMC）等细胞增殖或分化时GFP依然表达，丝毫不受影响。可见，GFP对细胞无毒害，在整个细胞都可观察到绿色荧光，细胞标记的强度野也是以上所有细胞标记技术最强的。而由于体内体外评价细胞标记效率有所不同，譬如细胞增殖速度的差异将导致体内体外细胞标记效率不同。但是，依据GFP转基因鼠细胞体外100%的标记效率，在体内定量分析移植的细胞也是最好的。可见，由于GFP转基因鼠BMCs在体内体外都表达GFP，并且不影响细胞的增殖和分化。这将大大促进细胞移植修复心脏疾病的定性定量研究。[56，62，63]
6.Y染色体标记细胞追踪移植细胞技术 选用雄性供体和雌性宿主，利用Y染色体作为标志物，最大的优点就是标记技术简单，而标记效率很高，利用FISH技术进行追踪标记的细胞能清楚的观察到。适合长期体内试验定量分析。[64-66]
7.磁性标记是Jeff Bulte 及其同事设计出一种小的磁性标记，用于追踪受标记的移植细胞在体内的运动信息，从而得知移植细胞的未来命运。这种医疗技术被称为磁共振成像（MRI）。 MRI是一种非侵入性技术，它利用强磁铁和无线电波，生成人体组织或一些内部结构的图像。 对于通过MRI技术对干细胞进行可视化和追踪而言，需要将干细胞进行磁性标记以便它们能与其它组织有所区别。 Bulte 及其同事研制出的这种高磁性探针，称为“MD-100”。他们声称，用MD-100标志人体神经干细胞是可行的，因为这些干细胞在携带上述磁性标志的情况下可以分化为正常的神经元。利用MRI技术，人们可以对标记后的细胞移植到老鼠大脑后进行至少六个月的追踪研究。[67-69]
当然，细胞移植领域的研究涉及从鼠到大动物等不同层次阶段。因此研究者就很有必要选择适合各自研究的最优标记技术。

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在此感谢CELLS、布兰卡、jetter、潘又林72、天之饺子、uhouuhou、bonest、zzy8896等各位战友！！感谢你们的积极参与标记技术的详细总结！！

附录：：
本周热点话题---干细胞特性标记以及追踪标记技术经验交流
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=76&id=548876&sty=3&keywords=%B1%EA%BC%C7%BC%BC%CA%F5
请介绍GFP标记方法
http://www.dxy.cn/bbs/thread/630793
Brdu标记方法
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=76&id=643264&sty=3&keywords=%B1%EA%BC%C7%BC%BC%CA%F5
DAPI标记
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=76&id=635749&sty=3&keywords=%B1%EA%BC%C7
BrdU标记
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=76&id=642254&sty=3&keywords=%B1%EA%BC%C7
DAPI 标记
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=76&id=636269&sty=3&keywords=%B1%EA%BC%C7
DiI标记方法
http://www.dxy.cn/bbs/thread/622545
hoechst 33342标记骨髓间充质干细胞
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=76&id=74799&sty=3&keywords=%B1%EA%BC%C7