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【求助】ABI 310进行对PCR产物测序出现问题,问题已自己解决,大家看看别犯同样错

医疗行业从业者 · 最后编辑于 2006-05-23 · IP 日本日本
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这个帖子发布于 19 年零 40 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我正在用ABI 310进行对PCR产物测序。我要测的序列都在300-500bp之间。让我感到困惑的是,在同一批测序样品中,每次一般都只有小部分测得很好,其它却很差、杂峰很多或根本就没有可以识别的峰型。
1)原先以为PCR产物特异性不好,但是我把纯化以后的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,证实产物的特异性还是很好的。

2)测序反应的问题:我做测序反应都是先将反应体系的各组分先混匀后发装到每个反应,最后再加PCR产物;同一批进行测序反应,如果有问题应该全部的测序都不好啊。

另外,同一样本,同样的引物,包括刚刚稀释的,以前做的非常好,现在也出现这种问题。

现在还找不出原因,十分焦急,请各位大侠多多指点啊!! 先谢过了!






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