【求助】提出质粒后再转化摇菌就得不到原来的质粒了

做T克隆（pMD18-T）得到的质粒，再重新做转化想多提些质粒，结果再怎么做也得不到原来的质粒了，用的是PCR检测。amp液体培养基摇出的菌看上去有些乳白色，用天为的质粒提取试剂盒提取时，第一步离心就发现菌体沉淀很少，用试剂1悬浮时发现根本悬浮不起来，菌体呈粘粘的一丝一丝。用菌的是HB101（takara）。我还以为是原来提的质粒有问题，但是拿原来提的质粒做PCR检测就有，转化后的PCR就没有。非常的奇怪，是不是重新转化摇菌的质粒不能少于多少？？有哪位高人知道，请帮忙解释一下，先谢谢了。