质粒转化

LB配置以300ml为例：酵母1.5g，NaCl 3g，蛋白胨 3g，300ml蒸馏水，灭菌

Amp工作浓度一比一千，10ml LB，挑一些负八十取出的菌种直接可以摇。

保菌可以甘油百分之五十，菌液百分之五十，也可以百分之三十甘油，菌液百分之七十，还有甘油百分之八十，菌液百分之二十，实验室各个师兄师姐自己保菌浓度有些差异，问题不大，都能摇起来。

下面是质粒转化感受态

1、感受态细胞取出负八十，置于冰上自然融化，约二十分钟左右

2、1ug质粒加入融化的感受态中，轻微用手指弹刮几下EP管

3、静置于冰上二十分钟

4、42度热激1min，置于冰上五分钟

5、加入1ml LB，不加入抗生素的，摇床200rpm 三十分钟

6、将1ml LB加入五十毫升离心管（一般加25ml LB，加入所带抗性的抗生素）

7、摇床 220rpm 37度 20h

8、保菌80%甘油+20%菌液=1ml，放入负八十冰箱保存；提取质粒，采用试剂盒

如果要涂板：放入EP管摇床半小时后，而后取出配置好的板子（已加入抗生素）涂板，玻璃棒先用75%酒精浸泡后用酒精灯烧灼一下，放置在试管架上待用，涂一块板子换一根。