【求助】请问如何减少免疫组化的背景染色？

我做的是大鼠肾脏MMP-9和PAI-1的免疫组化染色。MMP-9为山羊抗鼠的，PAI-1为兔抗鼠的，均为中山公司产品。选用中山公司相应的二抗试剂盒。反复做了好几批片子可结果总是不尽如人意，背景颜色比较深，难以判断阳性结果。
具体步骤如下：
1、石蜡包埋组织切片4μm，用的是中山公司的多聚赖氨酸防脱片的玻片，捞片后置60℃烤箱烤片2-4小时。
2、半月后，脱蜡水化
3、PBS液冲洗，3分钟×3；
4、切片置于1％triton-x-100液中37℃温浴10分种；
5、PBS液冲洗，3分钟×3；
6、每张切片加1滴（50µl）过氧化酶阻断溶液，室温孵育15分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性；
7、PBS液冲洗，3分钟×3；
8、枸橼酸盐修复液冲洗，3分种×2；
9、微波修复抗原（枸橼酸盐修复液微波高火加热至沸腾，放入切片，中低火维持沸腾8-10分种，自然冷却至室温）；
10、PBS液冲洗，3分钟×3；
11、滴加1滴（50µl）正常非免疫动物血清，室温孵育20分钟（阻滞非特异性染色）；
12、弃去血清，滴加一抗（PBS液稀释一抗、说明书推荐1:50-1:500，故取浓度1:200），置湿盒内37℃孵育1小时；
13、PBS液冲洗，3分钟×3；
14、滴加1滴（50µl）第二抗体，室温下孵育10分钟；
15、PBS冲洗，3分钟×3；
16、滴加1滴（50µl）链霉菌抗生物素—过氧化物酶溶液，室温下孵育10分钟；
17、PBS冲洗，3分钟×3；
18、滴加2滴（100µl）新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察1-3分钟，呈棕黄色为止；
19、自来水充分冲洗；
20、苏木素复染1分种，自来水充分冲洗；
21、梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。
以上过程均保持湿润，每一步都严格按照以上步骤进行，一抗浓度用1:50、1:100、1:200均试过，可片子看起来总是差不多，背景颜色深，不知何故。请各位老师不吝赐教！！多谢！！