求助:PAI-1基因多态性与糖尿病肾病的相关性研究

我刚开始做PCR，引物是根据文献合成的， 上游对照引物 Tm 值是61.99；GC%是46.15； 共同下游引物Tm值是66.00;GC%是70.00; 缺失型等位基因(4G)特异性引物Tm值是59.42;GC%是64.71; 插入型等位基因(5G)特异性引物Tm是61.83;GC%是70.59. 对照产物是320BP的，4G和5G的产物是240BP的.试了几天在Tm =67时出现需要的对照产物，并且条带亮度还可以.但是没出现4G和5G的产物.而且文献中写到出现对照产物320BP时,说明PCR反应体系最适宜.请各位帮忙分析一下，不胜感激！
我的PCR体系： 模板DNA2μl,上游对照引物 0.3μl
共同下游引物 0.3μl,4G特异型引物0.3μl ,5G特异型引物0.3μl.
Taq酶 0.2U
Taq buffer 2.5μl,MgCl2 1.3μl
DNTPs0.2μl
加水至25μl
94ºc 3m
94ºc 45s
67ºc 45s
72ºc 1m
35 cycles
72ºc 5m

郁闷中，急！！！！！！！！！！！！！！