实验必备！一文读懂 loading buffer 的神奇功效

一、Loading buffer的组份及作用

1.6×loading buffer一般配置

Loading buffer是电泳实验中的一个关键试剂，其组分设计旨在保护样品并确保电泳过程的顺利进行。

2. 各组分的作用

① EDTA（乙二胺四乙酸）：EDTA是一种常用的螯合剂，可结合多种金属离子，从而抑制核酸酶（如DNase和RNase）的活性，避免核酸降解，保护核酸完整性，进而提高实验的成功率。此外，EDTA通过螯合金属离子，防止其与带电核酸发生相互作用，这有助于避免电泳条带模糊或迁移速度异常。

② Glycerol（甘油）：甘油具有高密度特性，能显著增加样品的密度，使其大于TAE或其他电泳缓冲液的密度。这确保了样品能够沉降入点样孔，而不漂浮在表面，从而防止样品扩散到凝胶孔外，造成条带模糊或样品丢失。

③ Xylene Cyanol FF（二甲苯青FF）和 Bromophenol Blue（溴酚蓝）：这两种染料用于指示电泳过程的进展。通过观察这些染料的迁移速度，实验者可以适时监控并决定何时终止电泳，从而避免条带跑出凝胶范围，有助于获得明确的电泳结果。

④Xylene Cyanol FF（二甲苯青FF）：作为一种常用的核酸电泳指示剂，二甲苯青FF在分子生物学实验中发挥着重要作用。其水溶液呈现鲜明的蓝色，在电泳过程中可在凝胶上形成清晰的蓝色条带，便于实验人员实时观察电泳进程。该指示剂的迁移速率与DNA片段大小具有显著相关性：在1%琼脂糖凝胶中，其迁移速率与2Kb的双链线性DNA相当；而在1.4%琼脂糖凝胶中，则与1.6Kb的双链线性DNA迁移速率相近。这种特性使其成为判断电泳进程和确定电泳终止时间的可靠指标。值得注意的是，二甲苯青FF的分子量较大（538.63 g/mol），因此在电泳过程中迁移相对较慢，特别适用于监测较大DNA片段的迁移情况。

⑤Bromophenol Blue（溴酚蓝）：作为另一种常用的电泳指示剂，溴酚蓝在凝胶电泳中呈现明显的蓝紫色条带。其迁移特性与DNA片段大小密切相关，且在不同浓度的琼脂糖凝胶中表现出特定的迁移规律：在0.6%琼脂糖凝胶中，其迁移速率与1Kb的双链线性DNA相当；在1%琼脂糖凝胶中，与0.6Kb DNA片段相近；在1.4%琼脂糖凝胶中，与0.2Kb DNA片段相当；而在2%琼脂糖凝胶中，则与0.15Kb DNA片段的迁移速率相似。溴酚蓝的分子量较小（669.96 g/mol），因此在电泳过程中迁移较快，特别适用于监测较小DNA片段的迁移。在实际应用中，溴酚蓝和二甲苯青FF常常配合使用，以提供更全面的电泳进程指示。这两种指示剂的组合使用可以同时监测较大和较小DNA片段的迁移情况，为实验人员提供更准确的电泳进程判断依据。