[求助]原代细胞培养翻瓶时间以及成纤维细胞去除措施

看了大家很多关于原代培养的经验心得，自己也做了很长时间的肿瘤细胞的原代培养，但是一直没有成功，我的步骤如下，有什么不妥之处请大家指正：
1.标本为医院相关科室活检所得，从医院取道标本到我开始操作时间间隔大约为1小时左右，标本放在细胞生长液内，所用器材均已灭菌消毒
2.开超净台，有时候先用双抗洗一遍，有时候则不用；d－hanks液冲洗3遍
3.用生长液冲洗一遍，以除去多余d－hanks液‘
4.加入生长液，用眼科剪将血丝及明显的结缔组织去除，将瘤组织剪成蒜泥状的小块
5.用玻璃吸管小心将组织块移入培养瓶内，均匀排好，块间距0.2－0.5cm左右
6.翻转瓶，加入少量生长液，为刚刚能浸润组织块的量，置于37度普通培养箱中培养
7.我一般是6小时左右翻瓶，但还是有大量组织块浮起，尤以次日为多，不知是何原因？？？？？？？？？？？？？按照大家经验似乎3小时就可以了，但是我的为什么那么久还不行？？时间如此之长会不会影响细胞存活，直接导致培养失败？？如果用多聚赖氨酸处理培养平会好点吗？可不可以用免疫组化时用的多聚赖氨酸？怎么保证无菌？
8.现在我的培养瓶里面基本全是成纤维细胞，没有我所需要的东东啊，心里急死了！！！

请有经验的战友指点一下，我那儿有错误？应该怎么办才好？谢谢！！在线等待，期盼大家的help