有奖直播：深入解析流式实验难点（送资料手册、京东卡等 666 份好礼）
从 2024 年 8 月国自然基金项目宣布的结果看来，免疫研究仍然是疫情后时期的研究热点方向，中标数达 985 份。在免疫学研究课题中，流式细胞术是非常常见的实验技术。仅仅在过去一个月，就有 20 余篇以流式细胞术为主要方法的免疫相关研究，陆续发表在 Nature 正刊。
流式细胞术作为免疫研究的重要手段，具有难以被替代的地位。但做好流式实验却绝非易事，从样品的准备到荧光染色配色方案的选择，都令很多科研人员感到头大。（文中有流式实验资料手册、京东卡及外交官双肩包等 666 份惊喜好礼等你领！点此报名领取）
● 如何处理好流式样本？
● 在做配色时，大神们是如何做好配色的？
● 荧光会重叠、分群不明显，该怎么办呢？
● 如何画门？如何准确调节电压及补偿？
● 有什么工具和资源可以帮帮忙呀？
你是否也因为做不好流式而焦头烂额？为了让大家轻松上手流式细胞术和解决上述问题，赛默飞世尔科学技术专家联合丁香园，于 10 月 16 日 14:00 给大家带来免疫征途系列课程《细节决定成败，深入解析流式实验的关键因素》，在这里不仅会有流式基础入门知识，大师姐还会对实验中操作难点与重点进行细致地解析，以及多年经验总结的实验工具与资源分享！
请注意，成功报名直播的前 400 名幸运者免费获得赛默飞上百页纸质版的《流式细胞分析实验方案》，包含流式样本制备、细胞刺激、补偿调节及表型分析等 Protocol，干货满满，赶快来领取！在直播当日，还有机会获取网红赛默飞生命科学积木、超值京东卡、外交官双肩包、马克杯等惊喜好礼！
直播精彩内容抢先看
-流式检测中配色注意什么？-
1、了解流式细胞仪的配置
a. 仪器有哪些激光器和滤光片，可以激发哪些荧光染料，可以检测哪些荧光信号；不同荧光染料有各自不同的特点。
2、抗原表达量与荧光染料亮度相匹配
a. 提前了解蛋白靶标在样本中的表达量，同时了解荧光染料的亮度。表达量很低的靶标需要搭配亮度高的荧光素。
3、荧光染料发射光谱重叠最小化
a. 同一激光激发的染料光谱重叠尽可能地减小
b. 选用不同激光激发的荧光染料，如 FITC/APC
c. 同一细胞上的抗原尽可能地减少光谱重叠
4、注意串联染料联合使用可能的问题
a. 串联染料的信号衰退会降低 APC 或 PE 的灵敏度，最好选用更稳定的串联染料。
b. 避免样本暴露于光、高温或固定剂。如果样本需要固定，请选择十分稳定、有效组织串联染料的信号衰退的固定剂。
5、使用红激光激发自发荧光高的样本
a. 这是因为自发荧光在波长较长时迅速降低。在自发荧光很强的细胞上，建议选择红光激发和 APC 标记的抗体。
6、Panel 中需要加入死活染料，排除非特异性结合信号
a. 这是因为死细胞的自发荧光很强，且死细胞会非特异性结合抗体和染料。
还有 3 条减少光谱重叠的宝藏经验将在直播讲座中与你见面！大师姐将在此次直播中为各位讲解更多的珍贵经验，给你稳妥的实验方案！（点此报名）
流式手册干货抢先看
在流式实验中，会遇到许多细节问题，在赛默飞《流式细胞分析实验方案》中都可以找到相应的解答，来看看大师姐给出的红细胞裂解方案～
在流式分析淋巴组织细胞悬液或外周血之前，通常红细胞（RBC）应当除去。在这本手册中，多种红细胞裂解方法来应对不同的样本处理方式。
方案 A：使用 1X 或 10X 红细胞裂解缓冲液（由氯化铵产生的渗透压破碎无核红细胞）
● A1. 在全血样本中抗体染色后裂解红细胞
● A2. 在大体积人全血样本中裂解红细胞
● A3. 在小鼠 / 大鼠脾脏或骨髓样本中裂解红细胞
适用范围：全血样本（肝素或 EDTA 作为抗凝剂）或组织细胞悬液样本
方案 B：使用一步法固定 / 裂解液 1-step Fix/Lyse Solution（可裂解红细胞并同时固定淋巴细胞）
适用范围：适用于抗体染色后裂红和固定，最终上样分析；也适用于裂红和固定后再使用抗体染色
全血样本流式细胞染色方案
1、全血样本处理
a. 使用肝素采样管采集全血，或使用含有 10% EDTA 二钾（1 μL/100 μL 全血）的采样管。
b. 取 100 μL 未裂解的全血样本加到 12×75 mm 试管中，分别作为抗体染色管和单色对照管（用于补偿调节）：剩余未裂解的全血样本可制备未染色空白对照管。
2、细胞表面染色
a. 准备抗体混合管：将流式抗体加入到流式细胞染色缓冲液中。建议初次测试 1:50 至 1:100 的抗体稀释比例。避光。
b. 将抗体混合物加到 100 μL 全血中。
c. 在 2～8 ℃ 下振荡孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
d. 用 2 mL 流式细胞染色缓冲液洗涤样本。可重复洗涤。
e. 在 4 ℃ 下以 500 ×g 离心 5 分钟。弃掉上清液，然后用 500 μL 流式细胞染色缓冲液重悬细胞。
更多流式细胞实验方案及技巧均会展示在手册中，快来点此报名，前 400 名即可获得上百页流式实验纸质版手册～
心动福利双响炮
一、500 份《流式细胞分析实验方案》与赛默飞创新文具套装
前 400 名扫码填写问卷、最终报名成功的幸运者，即可获得赛默飞上百页《流式细胞分析实验方案》。这本手册中包含了全面的流式实验步骤，帮助您更好地完成流式实验，最终得到高质量流式结果。第 401～500 名扫码填写问卷、最终报名成功的幸运者，即可获得精美的赛默飞创新文具套装，共同探秘创新之旅。飞凡创新，与爱同行。
二、直播当日奖品：10 月 16 日当天直播 166 份惊喜好礼
直播当天抽奖环节，166 位流式幸运官将有机会获得网红赛默飞生命科学积木、外交官双肩包、保温杯、超值京东卡、赛默飞抗体系列冰盒、灵感系列笔记本、灵感系列 T 恤、灵感系列马克杯等丰厚精美礼品。
注：以上所有奖品预计将于 11 月上旬陆续发出。
最后编辑于 2024-10-11 · 浏览 236
