请教提蛋白的方法

方法一：RIPA裂解抽提总蛋白

1.细胞计数(约1×10ⁿ（n=7）的细胞),离心收集细胞(2000rpm×5min);

2.预冷1×PBS 1ml重悬洗2次,转至1.5ml EP管(2000rpm×5min);

3.去上清,后甩一次,将上清去尽;

4.按照如下比例加入裂解试剂:

RIPA:300ul/1×10ⁿ（n=7）细胞

PMSF:3ul(1:100)

Cocktail:0.3ul(1:1000)

5.吹打均匀,冰上放置30-40min,中间每10分钟Vortex一次;

6.4℃预冷离心:10000rpm ×10min;

7.收集上清,转移至已预冷新EP管,即为总蛋白。

方法二： Loading Buffer煮细胞抽提总蛋白

1.细胞计数(约1×10ⁿ（n=6）的细胞),离心收集细胞(2000rpm×5min);

2.预冷1×PBS 500ul重悬洗一次,转至500ul EP管(2000rpm×5min);

3.去上清,后甩一次,将上清去尽;

4.按每1×106的细胞加50ul loading buffer 加入2×loading;

5.Vortex一下,煮10～15min一次×2～3次直至无粘丝;

6.每次煮好将其放于冰上,静置约2min,Vortex一下,再甩一下;

7.三次后用枪吸起,如没有粘丝,即可;

8.每次上样约5ul(50ug/ul蛋白)

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请问方法一和方法二各有啥优缺点啊？

方法二可用于磷酸化蛋白的WB实验吗？