免疫组化细胞核染色影响到分析了，怎么办？

有时候苏木素染色细胞核会对免疫组化的结果造成影响，为了更精确地分析结果，我们应该如何分析呢？免疫组化分析用IOD还是AOD好？

1打开图片。

2Image-Color-Colour Deconvolution。

3选择H DAB模式。OK。

4会分成绿棕蓝三种颜色，棕色是免疫组化的阳性区域，蓝色是细胞核，我们只需要分析这两个。选中蓝色的，Type-8bit。

5增强对比度：Process-Enhance Contrast。

6OK。

7Image-Adjust-Threshold。

8调节滑轮，直到与实际结果相近，点击Apply。

9Analyze-Set Measurements。

10选中你想要的统计参数即可。Analyze-Measure。这样就统计出了细胞核的区域，阳性区域的统计分析棕色的那一张，同样的方法。

11如果想要排除细胞核造成的影响，可以使用阳性区域的Integrated density/细胞核的Integrated density。

12补充：免疫组化分析要使用IOD还是AOD好呢？

IntDen的值为该图的累积光密度值（Integratedoption density，IOD），即图片上各点的光密度值累加得到。IOD值与目的蛋白的总量成正比。

IOD值除以目的蛋白分布区域的面积，得到平均光密度值（AverageOptical Density，AOD），通过运用AOD值作图，运用统计学分析，即可比较实验组和对照组目的蛋白表达量的差异。

其实AOD=IOD/Area，AOD就是Mean gray value，我个人是比较喜欢AOD的，其实都是可以的，看你自己的需求。如果像我这里讲到的阳性区域的Integrated density/细胞核的Integrated density，这种分析思路类似于Western blot条带的分析，只是把内参的IOD换成了细胞核的IOD。其实思路就是为了归一化，使分析结果更加可靠。