刚提的RNA为什么会降解?
真的,我快被这个问题折磨疯了,恳请大家帮忙看看是什么原因
本周一处死了小鼠,切了皮肤(酒精棉球擦了皮肤,切完放PBS+DEPC水中洗了两遍),放进冻存管里过了液氮,放进负80冰箱,下午用Trizol提了RNA,测了浓度和纯度都可以,稀释后浓度可达500多,A260/280均为2.0几,后面进行逆转录,但跑qPCR没结果(内参都没有跑出来,显示红孔),开始以为是逆转录的问题,因为RNA的质量没问题,就在周二重新逆转录再次跑qPCR,还是不行,没出来结果,内参依然没跑出来。于是周二下午重新提取RNA(还是之前的组织),这时老师说跑个琼脂糖凝胶电泳看看RNA完整性,这个才是金标准,于是我提完RNA测完浓度和纯度,结果依然不错,就跑了电泳(1%的琼脂糖凝胶,120V,15min,加的体系是2ul RNA+2ul loading buffer+6ul DEPC水),结果如图:

大家都说RNA降解了,因为我操作都是师姐盯着操作的,之前提细胞RNA都没问题。周三我再次重新提,所有的东西全部换了新的,新的无酶枪头,新的DEPC水,新的磁珠,提出来后检查纯度和浓度依然可以,但是,跑胶还是跑不出来,和这张图差不多,我们考虑会不会是电泳时候出了问题,又配胶按同样的条件给师弟上个月提的细胞RNA跑胶,结果他的RNA条带能出来。
今天我又取了小鼠皮肤,一取完就用PBS洗了,马上提RNA,今天还是师弟提的,我在旁边看,最后,浓度和纯度还是没问题,跑了两块胶,电泳依然没出来条带(如下图)。
我们用的所有试剂,用的台子都是实验室其他人一直都在使用的,他们提RNA跑qPCR没有问题。

我们现在实在没辙了,求大家帮忙看看是什么问题,谢谢,好人一生平安!!!
最后编辑于 2024-05-30 · 浏览 1616