[求助]了解脂肪间质细胞／脂肪干细胞／ADSCs的战友请进来！

我做的是脂肪间质细胞培养，方法如下：
取人皮下脂肪，含2抗的PBS清洗，剪取无血管的小块脂肪组织，在西林瓶中剪碎，大概有5毫升脂肪的样子，（发现脂肪组织不好剪碎，有什么技巧呢？剪多久？），剪碎后置于50毫升离心管内，加入2倍体积的0.075%的一型胶原酶，消化。
我试过
1.室温下消化30分钟，间断手摇振荡。
2..培养箱（37度）内消化1个小时，间断拿出来振荡。
3.37度水浴箱消化30分钟，45分钟，90分钟，间断拿出振荡。
4.空气恒温37度摇床低频率振荡消化90分钟。
消化后加入等体积DMEM/F-12,1200转10分钟,倒去上层漂浮的脂肪，取沉淀用培养基重悬，200目筛过滤，滤液再离心，培养基重悬后，玻璃培养瓶/塑料瓶培养，培养基为DMEM/F-12+10%FBS+双抗。
以上方法都没有贴壁的细胞，很是烦恼。
我发现离心后上层的脂肪块好像没什么变化，你是怎么判断消化程度的呢？或许我的酶有问题。培养的时候感觉有很多红细胞，我没有用氯化铵裂解．
各位可以辨认刚培养前的干细胞吗？单个核细胞？

现在没有贴壁成功，甚是苦恼．非常感激战友可以指出失败原因，恳请传授经验．能提供详细的操作技巧．
万分感激！！！！！！