【求助】如何连接三个DNA片段
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我在三个片段的两端均加了酶切位点,并且按照操作说明进行了酶切反应,尔后将这三个经过酶切的片段用T4连接酶在一个标准反应体系中进行连接,好象连接不上,我用PCR进行了检测),(酶切后进行了回收,但没办法确定是否切开,因为切下来的仅是酶切位点外的保护碱基,连接之前进行了95度灭活5分钟),不知道为何?请高人指点!
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我在三个片段的两端均加了酶切位点,并且按照操作说明进行了酶切反应,尔后将这三个经过酶切的片段用T4连接酶在一个标准反应体系中进行连接,好象连接不上,我用PCR进行了检测),(酶切后进行了回收,但没办法确定是否切开,因为切下来的仅是酶切位点外的保护碱基,连接之前进行了95度灭活5分钟),不知道为何?请高人指点!
