如何提取RNA：

如何提取RNA：

1. 将匀浆样品在15-30℃放置5min，使得核酸蛋白复合物完全分离。

2. 按氯仿：trizol=1:5加入100μl氯仿抽提（氯仿需在通风橱中加入），涡旋剧烈震荡15s，使trizol与RNA充分混匀，室温放置3min，如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2min代替，CHCl3会沉在底部。

3. 4℃，12000g，离心15min，离心后样品分层：红色的有机层、中间层和上层无色的水相，RNA主要位于上层水相中，中间白色条带为蛋白质，将上层水相转移到新的无酶EP管中，切勿吸到中间白色蛋白质（如要分离蛋白质和DNA，可保留红色的有机相）。

4. 按异丙醇：trizol=1:2往新管中加入250μl异丙醇，上下颠倒混匀，室温沉淀10min（或者-20度过夜，如果觉得RNA含量比较少，可以-20放置过夜，这样提取出来的RNA浓度会更高），异丙醇沉淀水相中的RNA。

5. 记得离心时记住放置的方向，因为待会RNA会被离心到其中一侧。4℃，12000g，离心10min，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现白色胶状沉淀，RNA沉于管底（若无沉淀，可加大转速继续离14000g）。

6. 弃去上清，用75%乙醇洗涤RNA沉淀。按75%乙醇：trizol=1:1加入500μl 75%乙醇，上下颠倒混匀，4℃，14000g，离心5min，弃上清（全程直接用大枪套小枪吸取，这样可以减少冲击力使液体荡起来，可以减少RNA的损失）。

7. 这一步可不需要，但是有的话， 260/280和260/230的比值会更加好。100%无水乙醇洗涤RNA沉淀。按100%乙醇：trizol=1:1加入500μl 100%乙醇，上下颠倒混匀，4℃，10000g，离心5min，弃上清（用大枪头套小枪头吸取上清，切勿吸走RNA，记得一定要小心一点吸取）。

8. 弃去上清之后，4℃，10000g，离心5min，空转5min，去除掉多余的水分，方便后续晾干。然后用10μL的枪头小心吸掉上清。

9. 打开盖子，放在通风橱把风速调至最大，（室温开口放置）放置10-20min干燥（大概10min就可以），等待RNA沉淀变透明即可，不要放置过久，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入10μl DEPC水，用枪头吸打几次，使RNA溶解（可在55-60℃放置10-15min以充分溶解RNA，不用，直接震荡混匀，离心下来，开始测浓度就可以）。

检测RNA浓度，（记得调RNA！ 260/280=1.8~2.0最优，260/230=2以上，越大越好。）光DNA污染，260/280不会低于1.8，因为纯的DNA为1.8左右，加了RNA会高于1.8。所以260/280小于1.8是蛋白质污染。若260/230比值在2.1左右，说明是正常的，说明小分子污染比较少，比如酚类。