动物实验日常操作：小鼠骨髓间充质细胞元代分离

贴壁筛选法是利用细胞贴壁时间及贴壁牢固性的不同，逐步将非贴壁细胞和其它杂质细胞去除的一种简单易行的方法，常用于干细胞的培养中，因此用于分离BMSCs最为广泛。

利用BMSCs贴壁生长特性，更换培养液逐步去除漂浮生长的造血系统细胞即可获得较纯化的BMSCs；而且骨髓中的造血干细胞能分泌生长因子和促贴壁物质,可促进BMSCs贴壁生长，贴壁筛选法也常被称为直接培养法或者全骨髓法。

操作步骤

01

以颈椎脱臼法处死SPF级3-4周龄C57BL/6J小鼠或者SD/Wistar大鼠，用75%乙醇浸泡。

02

随后在鼠的腿的位置剪开外皮和内皮，无菌状态下取出双侧股骨和胫骨，浸泡于无菌含双抗PBS溶液中。剔除股骨和胫骨周围的肌肉、结缔组织，用含双抗的PBS溶液清洗三遍。

03

用眼科剪剪去股骨和胫骨的两端，暴露骨髓腔。

04

用注射器以完全培养基反复冲洗骨髓腔直至骨头发白。

05

收集骨髓液，离心，后加入适当培养基（含20%血清）接种于培养基皿中置于37℃，5％ CO2，饱和湿度的细胞培养箱中培养。

06

24-48h后去悬浮，接下来的每3天换液一次，直到需要传代。