高品质病理检测（十四）—BrdU染色
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染色原理
- BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶的衍生物，常用于标记活细胞中新合成的DNA，可代替胸腺嘧啶选择性整合到复制细胞中的新合成的DNA(细胞周期S期);
- 随着DNA复制进入子细胞中，BrdU特异性抗体可以用于检测BrdU的渗入，从而判断细胞的增殖能力。
染色步骤
- 4%多聚甲醛固定10分钟。
- 用2N HCl（浓盐酸：水=1:6）在37°C孵育30 min使核酸变性，暴露BrdU结合稳点；
- 用PBS洗3次，每次5 min；
- 用含5% FBS的封闭液（Blocking buffer）常温下封闭1 h；
- 4 ℃下孵育一抗BrdU与其他合染抗体过夜；
- 常温下PBS洗3次，每次5 min；
- 常温下孵育荧光二抗（1：1000）2 h;
- PBS洗3次，每次5 min；
- 用5 µg/mL DAPI工作液在常温下孵育5min；
- 再用PBS常温下洗3次，每次5 min；
- 抗瘁灭剂封片剂封片，37°C烘箱中稍作烘干直到盖玻片不自行滑动；
- 普通荧光显微镜或激光共聚焦显微镜采集图片。
案例展示
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