求助🆘石蜡切片免疫荧光
研二菜鸟,最近第一次做石蜡切片免疫荧光。protocol啥的都是自己网上找的,但是做了好几次最后染出来的荧光如下图,整个组织都染上了,就很奇怪,文献里不是这样的,求园里的大神指导!!
(做的大鼠轮廓乳头,主要研究味蕾)
步骤:4% PFA固定,常规石蜡包埋切片,60°拷片2h;①脱蜡复水:二甲苯12各30min,无水乙醇10min,95乙醇10min,85乙醇10min,75乙醇10min,水10min;②抗原修复:PH9.0的tris-edta 95°水浴30min;PBST洗3次,5min/次;③0.05%trition 通透10min,PBST洗3次,5min/次;④5%bsa封闭30min,37°;⑤一抗500x过夜,4°;⑥PBST洗3次,5min/次;二抗1000x 室温孵育2h;⑦PBST洗5次,5min/次;⑧dapi染5min,PBST洗3次,5min/次;⑨抗荧光淬灭剂封片。
一抗:Nordic BioSite的兔抗/二抗:abcam的羊抗兔Alexa Fluor 488
用赛默飞的EVOS M5000拍的图片
求园里的老师指导指导是哪里出了问题!!




最后编辑于 2023-09-17 · 浏览 688