[求助]提取原代乳腺上皮细胞
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本人研二学生，课题实验需要提取小鼠原代乳腺上皮细胞。提了三次，都失败了
操作如下：
取乳腺脂肪垫，用加了双抗的PBS涮洗，剪碎，加混合酶消化1h，离心，去沉淀，再离心，取沉淀，重悬，过70μm细胞筛，接种到培养基，然后差速贴壁两次。
第一次提出来了细胞，看起来像乳腺细胞，但还没鉴定，传代就全漂了（不知道为啥π_π）。
第二次在PBS之前用酒精涮了一下，其余都一样，但提出来杂质更多，差速贴壁后接种到培养皿里漂的细胞也很多，换液的时候污染了（我真该死啊😱）。
第三次增加了离心的速度和时间，沉淀的东西更多了，但是杂质也更多了，漂的细胞也很多
24小时了贴壁的就零星几个，其他全在上面漂着。
想问问各位大牛，我的操作方法是否有误？或者是有哪些需要注意的地方吗？救救孩子吧
最后编辑于 2023-09-06 · 浏览 516
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