病毒挑斑纯化不长怎么办？
Q：收集病毒感染+转染的上清（转染后是有荧光的）去吸附细胞，再铺琼脂，就是死活不长 请问怎么办，病毒连续挑斑纯化到底怎么操作效率比较高
A1：考虑是病毒浓度太低，可以多接种一些，保证接种量，浓度提高后就会长了
A2：先多挑几个病毒斑进行扩增，然后纯化之后在进行下面的步骤可以提高效率
A3：在处理病毒感染和转染的上清液时，如果您在尝试去吸附细胞并铺设琼脂时遇到困难，以下是一些建议：
1. 确保细胞状态良好：确保您的细胞处于适当的状态，具有良好的健康状况和适当的细胞密度。细胞的健康状态对于成功铺设琼脂非常重要。
2. 优化琼脂浓度：尝试不同浓度的琼脂来找到适合您的实验的最佳浓度。过高或过低的琼脂浓度都可能导致困难。
3. 调整上清液处理时间：在将上清液添加到细胞上之前，可以尝试不同的处理时间和条件。有时，较短的处理时间可能更适合。
4. 使用适当的培养基：确保使用适当的培养基来支持细胞生长和适应。
关于病毒的连续挑斑纯化，以下是一些常见的操作步骤：
1. 取一小部分含有病毒的上清液，称为”母液”。
2. 将母液加入到细胞培养皿中，让病毒感染细胞。
3. 观察感染情况，当感染适当程度时，将细胞和上清液一起收集。
4. 将收集的细胞和上清液进行离心，分离细胞和上清液。
5. 取上清液作为”次代液”，将其加入到新的细胞培养皿中，进行下一轮感染。
6. 重复步骤3-5，多次进行连续感染和收集上清液的过程。
通过多次连续挑斑纯化，您可以逐渐纯化目标病毒并提高纯化效率。请注意，在每一轮连续感染后，应调整细胞密度和感染程度以控制感染的合适程度。此外，对于病毒纯化，合适的实验条件和技术操作非常重要，具体操作步骤可能因病毒类型和实验目的而有所不同。
Q：pGEX-4T质粒能否用于电转干细胞
A1：可以，pGEX-4T质粒能够用于电转干细胞。
A2：当然可以，pgex-4t质粒是常用的电转质粒
Q：如何用曲线图表征琼脂糖凝胶电泳中条带的亮度来表征DNA含量
A1：可以按照以下步骤进行：
1. 进行琼脂糖凝胶电泳：将不同浓度的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，以分离DNA片段。使用一组标准样品，其中包含已知浓度的DNA片段，以便用作比较参考。
2. 图像获取和分析：使用凝胶图像获取设备（如凝胶成像系统）获取琼脂糖凝胶电泳的图像。然后，使用图像分析软件（如ImageJ或GelAnalyzer）对图像进行分析，测量每个DNA条带的亮度。
3. 绘制曲线图：将DNA样品的浓度（或相关的质量）作为X轴，将条带的亮度作为Y轴。使用所得到的数据绘制曲线图，以显示DNA浓度与亮度之间的关系。
4. 标定曲线：使用已知浓度的DNA标准样品的数据点，通过拟合曲线的方法来标定曲线。这样，您可以根据曲线上的亮度值推断未知DNA样品的浓度。
A2：如果DNA出现降解或者是混有其他杂质，例如蛋白质、RNA的话，那么琼脂糖凝胶就能够检测得到DNA的质量。
标准主要是通过观察电泳条带的亮度，通过亮度就可以粗略地计算出DNA条带的含量。如果DNA出现损失，对应的条带就会变暗或者是消失。
线性的单一DNA样品一般是单条带质粒的话可能会有2-3条带
如果条带变宽、变暗、或者变成弥散的DNA条带，表示DNA非特异的降解.
如果条带变成多条表示可能被酶切如果质粒被单酶切，可能变成一条亮带.
如果有蛋白质污染，上样孔可能发亮如果有RNA污染可能小分子量部分会有弥散
Q：有人知道有哪些温度敏感型复制子原件吗？
A1：在温度敏感型复制子原件领域，存在一些已知的温度敏感复制子原件，其中一些常见的包括：
1. oriR6Kγ（oriR6K-gam）：这是一种广泛应用于分子生物学实验中的温度敏感复制子原件。在低温（通常为30℃）下活性较低，但在高温（通常为42℃）下能够较高效地复制。
2. pSC101：这是另一个常用的温度敏感复制子原件，也常用于分子生物学实验。在低温（通常为30℃）下具有较高的复制效率，但在高温（通常为42℃）下会被抑制。
3. oriP：这是爱泼斯坦-巴尔病毒（Epstein-Barr virus）基因组的复制子原件，也是温度敏感型的。在低温（通常为30℃）下，oriP的复制效率较高，而在高温下（通常为37℃），复制效率明显降低。
A2：plCori是一种质粒载体，用于在哺乳动物细胞中高效表达外源蛋白。plCori载体中包含了多个功能元件，其中包括：plCori载体中使用的CMV启动子在许多哺乳动物细胞中都具有高效的启动转录作用。
多克隆位点：在哺乳动物细胞中插入外源DNA序列的区域。plCori载体中的MCS包含多个限制性内切酶切割位点，可以方便地插入各种外源DNA序列。转录终止子：plCori载体中使用的是SV40转录终止子，它可以提高外源DNA序列的表达效率。
抗生素抗性基因：在细菌中选择和筛选plCori载体的DNA复制体系。plCori载体中使用的是抗氨苄青霉素的抗性基因。
A3：温度敏感型复制子原件包括：
1. Alu元件：这是人类基因组中最常见的复制子原件之一，具有温度敏感性。随着温度的升高，其复制率也会增加。
2. L1元件：这是人类基因组中最常见的长转座子元件之一，也具有温度敏感性。温度升高可以促进其复制和插入。
3. SINE元件：这是一类短转座子元件，也具有温度敏感性。温度升高可以促进其复制和插入。
4. ERV元件：这是一类内源性逆转录病毒元件，也具有温度敏感性。温度升高可以促进其复制和插入。
需要注意的是，这些元件的温度敏感性并不是绝对的，温度对其复制和插入的影响也受到其他因素的调节。
Q：有人知道载体上plCori这个原件作用吗？
A1：pICori是一种用于大肠杆菌（E. coli）的复制子原件，被用作质粒载体上的起始复制点。该复制子原件可以在细菌中实现高效的复制，并在细胞分裂时保持质粒的稳定性。
pICori的作用类似于其他一般的质粒复制子原件，它提供了必要的序列和元件，使得质粒能够自主地复制并在细菌中维持稳定。具体来说，pICori包含了起始复制点和复制所需的其他序列，这些序列通常与DNA复制酶、启动子和终止子等相关。通过与宿主细胞的细胞周期和复制机制相互作用，pICori确保了质粒的复制和传递。
pICori广泛应用于分子生物学和基因工程研究中，作为质粒载体的复制子原件。它可以用于质粒构建、基因克隆、蛋白表达等实验和应用中。通过插入目标基因或其他感兴趣的序列到pICori质粒中，可以实现其在细菌中的高效复制和表达。
A2：plCori是一种质粒载体，用于在哺乳动物细胞中高效表达外源蛋白。plCori载体中包含了多个功能元件，其中包括：plCori载体中使用的CMV启动子在许多哺乳动物细胞中都具有高效的启动转录作用。
多克隆位点：在哺乳动物细胞中插入外源DNA序列的区域。plCori载体中的MCS包含多个限制性内切酶切割位点，可以方便地插入各种外源DNA序列。转录终止子：plCori载体中使用的是SV40转录终止子，它可以提高外源DNA序列的表达效率。
抗生素抗性基因：在细菌中选择和筛选plCori载体的DNA复制体系。plCori载体中使用的是抗氨苄青霉素的抗性基因。
A3：plCori元件是一种常用的哺乳动物表达载体的启动子，其作用是在哺乳动物细胞中促进外源基因的转录和表达。plCori元件源自于家兔β-球蛋白基因的启动子区域，经过改造后成为了一种高效的表达载体启动子。plCori元件具有以下特点：
1. 高效性：plCori元件在哺乳动物细胞中的启动转录效率很高，能够促进外源基因的高水平表达。
2. 广泛适用性：plCori元件不仅在常规的哺乳动物细胞中具有高效启动转录作用，还可以在多种哺乳动物细胞和组织中发挥作用。
3. 可调节性：plCori元件的启动转录效率可以受到其他启动子、转录因子和调控元件的调节，能够进行基因表达的调控。
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最后编辑于 2023-06-26 · 浏览 776
