wb提取的蛋白一保存就出问题。求帮助

wb跑电泳前裂解得到精子蛋白，裂解用的sds加了蛋白酶抑制剂也加了pmsf，-20℃保存蛋白。第一次跑，目的蛋白，一抗二抗去除液洗完膜在孵育的内参蛋白也没有问题，都很好看。

然后第二次用-20℃保存过的蛋白跑，比如保存了一天。蛋白溶液就出现了絮状沉淀，然后跑出来的蛋白目的可以，但是一抗二抗去除液用过后，内参就很淡。

第一张图，保存过的蛋白出现了絮状沉淀

第二三张图第一次也就是新鲜提取的蛋白样本结果

第四张就是保存过的样本，一抗二抗洗完后内参就很淡了，maker也出现了条带。