WB上样到60ug内参还是很浅，目的条带出不来
发布于 2022-10-27 · 浏览 2533 · IP 广东广东
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各位站友，实验出现奇怪的现象，实在是想不通，求帮助！我用的细胞是中性粒细胞，大约2×10*6个细胞做一个组最后提取蛋白，测得的浓度不低，加40ul裂解液的情况浓度约在8ug/ul左右，上样量从18-60ug内参都特别浅，下图是上样60ug的图，内参很浅，目的条带出不来。
我首先排除操作的问题，做WB1年多了，操作上没有问题，做其他细胞的时候都正常。
其次排除抗体的问题，用其他细胞做的同批实验，抗体都是一样的，结果显示内参，目的条带都正常。所以抗体没有问题。
也排除裂解不充分的问题，应用超声破碎，再在冰上裂解30分钟和不用超声破碎结果差不多。
所以我考虑是不是细胞的问题，只有中性粒细胞出现这样的问题，可是都是一样的操作，提蛋白测出的浓度也不低，怎么就会出现这样的问题？实在是想不明白。有没有哪位好心人知道，求指导！！！
最后编辑于 2022-10-27 · 浏览 2533
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