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【共享】前列腺炎实验研究进展

泌尿外科医师 · 最后编辑于 2005-10-18 · IP 北京北京
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前列腺炎动物实验研究进展
前列腺炎是中青年的常见病和多发病,发病率高达10%,严重影响广大患者的身心健康,迫切需要有效的治疗方案。中医药治疗疗效肯定。为了进一步了解前列腺炎疾病的病理生理机制,探究中医药对其的作用机制,及其多种动物模型的制作,运用不同药物剂型进行研究,笔者就近十年来相关的实验研究情况加以论述:
一.动物模型制备
1.非细菌性前列腺炎动物模型制备
戴氏等取雄性雄性wistar大鼠60只,随机分为6组,体重为159~244g。10%乌拉坦麻醉,在前列腺头叶上的精液囊注入1%角叉菜胶生理盐水溶液0.1ml,分别以术后0、8、12、24、36、48h麻醉剖腹,取前列腺液测白细胞数和卵磷脂小体密度。[1]张氏等选雄性wistar大鼠34只,体重350~400g,麻醉,无菌条件下于前列腺背叶注入25%消痔灵注射液0.2ml,术后第七天处死大鼠,取标本观察。[2]唐氏等取雄性wistar大鼠30只,体重240~260g,随机分为实验组和对照组两组,实验组10大鼠注入3.3mol/l的甲醛—巴豆(8∶2)混合液10㎕,另取10只大鼠注入20㎕;对照组同时注入20ul无菌注射用水。[3]李氏等用SD清洁级大鼠101只,在前列腺一侧背叶、一侧腹叶及背外侧叶三个部位注入2%琼脂溶液0.2ml,造模期14天。[4]Kamijo等选择10个月龄的wistar老龄大鼠,在乙醚麻醉下进行去势手术,术后第一天开始给大鼠后背部注射17β雌二醇,计量为0.25㎎/(2ml*㎏),用芝麻油稀释,连续30天注射。 [5]叶氏等采用免疫佐剂法建立模型。用小鼠32只,随即分为4组(每组六只),完全福氏佐剂组和正常组(各四只),除正常组外其余各组先予以腹腔注射完全福氏佐剂0.5ml。第二天造模组按不同组别和抗原浓度多点皮下注射0.5 ml纯化前列腺抗原蛋白,其中低剂量浓度为0.2㎎/ ml、中剂量组为0.6㎎/ ml、高剂量组为2.0㎎/ ml。同时腹腔注射百白破疫苗0.1 ml。完全福氏佐剂组予以相同剂量皮下和腹腔注射,正常组不予任何处理。[6]
2. 细菌性前列腺炎动物模型制备
戴氏等取雄性wistar大鼠55只,随即分成七组,其中一组作正常对照用,余六组用10%乌拉坦麻醉手术,与前列腺头叶相接的精囊注射1.4*107个/ ml大肠杆菌生理盐水混悬液0.1 ml,分别与术后1、2、3、4、5、6天麻醉剖腹,取前列腺液测白细胞数,查卵磷脂小体。[7]山氏等用前列腺液分离处的优势菌造模。选用 wistar大鼠60只,体重150-180g,把从前列腺液中分离的两种优势菌痤疮和表皮葡萄球菌用糖盐水配成1.5亿/ ml与冷至45℃的0.2%琼脂对半稀释取0.2 ml直接注入前列腺背叶。[8]郑氏等用雄性wistar大鼠32只,体重180-245g,采用两期造模法。一期造模:将动物随机分成三组,即造模1组12只,2组12只,正常对照组8只。1组单侧叶注入金黄色葡萄球菌0.05 ml;2组单侧叶注入大肠杆菌0.05 ml。二期造模:将一期造模动物予术后第4天重新随机分3组,行二期造模。采用三碘甲状腺原氨酸,按500ug/㎏皮下注射,隔日一次,共三次。[9]毕氏等用注射器针头刺破大鼠前列腺,再用白金针蘸取大肠杆菌菌株,从刺破处接种到大鼠前列腺中,接种后缝合。[10]刘氏等用雄性大白兔17只,体重在2.5㎏左右,随机分成3组,对照组5只,金葡菌组6只,白葡菌组6只。在前列腺背叶注射不同浓度的金葡菌和白葡菌液,定期处死。[11]章氏等用雄性大白兔27只,体重2.5-3.0㎏。随机分为实验组(23只)和对照组(4只)。采用标准大肠杆菌,在前置37℃培养箱内培养12小时,
肉汤培养配成107-109CFU/ ml浓度菌液,无菌条件下将自制带一端孔和两侧孔的橡胶管插入兔后尿道,实验组每次灌注菌液2-2.5 ml;对照组灌注等量0.9%盐水。实验前三天,每日一次,以后在第10、20、30、40、55、65天灌注。实验组每次灌注后24、48小时做血培养,灌注后48-72小时处死取材,对照组第65天处死。[12]
二. 实验研究
2.1灌胃
2.1.1 冲剂
薛氏等将实验小鼠分为正常组、模型对照组、炎列平大剂量组、小剂量组、舍尼通组5组,每组12只,用灌胃法给药。结果:从光镜检测中可见,模型组小鼠前列腺组织有明显血管扩张,大量淋巴细胞和浆细胞浸润于导管周围,腺上皮增生,腺体扩张、腔内有淀粉样物质,间质疏松等表现,而各治疗组均出现不同程度的改善,尤以炎列平大剂量组对腺上皮增生和慢性炎症细胞浸润改善明显,光镜下仅见腺体轻度增生,其它无异常,与正常前列腺组织相近,以炎列平组更显著;从透射电镜结果来看,在5000和8000倍观察条件下,各组治疗效果以炎列平大剂量组为明显,其腺上皮细胞增生、细胞内分泌颗粒的增加均有明显的改善,与正常前列腺组织的电镜观察结果相近。而炎列平小剂量组稍差,可见腺上皮细胞增生,排列整齐,胞腔增大,内有部分分泌颗粒,对照组显示结果更差,可见腺上皮细胞增大,排列紊乱,胞腔增大,部分含有分泌颗粒。抗纤维增生:经炎列平灌药后的实验小鼠纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)水平有明显降低,且存在着很好的量效关系,说明炎列平的治疗可能与其抗局部纤维化作用有关。[13]
2.1.2 口服液
任氏等用雄性小白鼠40只,随机分4组,分别以常水、二黄口服液及前列康灌胃,每日一次,连续十天。实验表明,给动物连续灌服一定量的二黄口服液,可明显增强吞噬细胞的吞噬功能,(p<0.01),显著升高血清溶血素水平,而且大剂量作用强于小剂量,表明二黄口服液可明显增强机体非特异性免疫功能及体液免疫功能,有助于证实该方药临床补气扶正之功效;抗炎实验表明,本口服液有明显抗二甲苯致动物耳廓炎症作用;二黄口服液抗垂体后叶素致微循环障碍实验还表明,该方有良好的改善微循环作用,能有效拮抗垂体后叶素所致动物微循环障碍,表明:该方有活血化淤功效及促进炎性病变组织修复作用。体外抑菌试验采用平板法,结果显示二黄口服液对大肠杆菌有明显的抑菌作用,对变形杆菌及痢疾杆菌抑制作用以较好。[14]
2.1.3 汤剂
郑氏等采用二期造模法造模,随机分观察组、阳性对照组、空白对照组三组。于一期造模后第四天(和二期造模同步)开始灌胃;观察组每只给复方前列汤颗粒剂水溶液2毫升(每毫升含生药5.4克),阳性对照组每只给男康片水溶液2毫升(每毫升含生药6克);空白对照组每只给蒸馏水2毫升;早晚各一次,连续灌胃30天。实验结果显示,复方前列汤可使炎症模型动物的体温下降,体重增长加快,抑制模型动物前列腺腺体增生,改善局部血液循环的病理性扩张和淤血状态,其作用明显优于对照组(p<0.01)。[9]陈氏等用前列清合剂给家兔灌胃,结果:前列清合剂对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌、卡他球菌和大肠杆菌均有抑菌作用;对乙型溶血性链球菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.10kg /L,对其他4个菌种的MIC均为0.20kg /L。前列清合剂大、中剂量对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、大鼠蛋清性足肿胀、大鼠甲醛性足肿胀以及大鼠棉球性肉芽肿均有明显的抑制作用。表明前列清合剂可降低毛细血管通透性,减少渗出,抑制纤维组织的增生而具有抗炎作用。前列清合剂大、小两个剂量对兔微循环的血管管径、管径截面积⑵骄??魉俾省⑵骄??髁康染?哂胁煌?潭鹊脑黾雍透纳谱饔?其中大剂量前列清合剂对血瘀模型兔耳廓微循环的改善作用更为显著,表明前列清合剂具有改善微循环的作用。[15] 范氏等对小鼠进行抗炎、镇痛实验以及抑菌实验动物,实验结果表明:通淋汤可显著性抑制小鼠炎性肿胀,降低毛细血管通透性,抑制肉芽肿生成,且有良好的镇痛效果,对金黄色葡球菌、白色念珠菌、大肠杆菌及绿脓杆菌有抑制作用。[16]
2.1.4片剂
陈氏等给大鼠灌服前列安片(4.0g/kg、2.0g/kg),可以抑制大鼠角叉菜胶性足肿,抑制小鼠所致肉芽肿,抑制大鼠巴豆油性气囊渗出与囊壁肉芽肿,说明该方有抗炎性渗出、改善微循环、抗组织增生的作用,即对亚急性与慢性炎症有一定的改善作用。[17] 张氏等随机把实验性家兔分为汤剂组、胶囊组和对照组三组,予以灌胃。实验研究结果表明前列腺方有降低实验性家兔血瘀模型的全血粘度、血小板粘附率、体外血栓干重; 对肾上腺素引起的小鼠微循环障碍实验提示前列腺汤对肾上腺素引起的小鼠微动脉血流停止或减慢有十分显著的推迟发生作用,对管径有推迟收缩作用。镇痛实验显示给药组小鼠扭体次数与对照组比较明显减少(p<0 01)。[18]

2.1.5 丸剂
韦氏等取50只雄性大鼠,随即分成5组:清淋祛毒丸高、中、低剂量组、头孢氨苄组合模型对照组。结果表明,清淋祛毒丸各计量组的白细胞数均小于模型对照组,而高、中计量组的卵磷脂小体密度均大于模型对照组,差异有非常显著或显著性意义(P<0.01或P<0.05);清淋祛毒丸各计量组IgG含量均小于模型组,炎症病变程度也轻于模型对照组,中计量组纤维母细胞增生程度与模型组差异有显著性意义。[19]
2.1.6 颗粒
李氏等用消痔灵液造模成功后,随机分四组即空白对照组(生理盐水灌服)、前康宁高剂量组(:给药剂量大鼠6g/(kg•d),小鼠10g/(kg•d))、前康宁低剂量组(给药剂量大鼠3g/(kg•d),小鼠5g/(kg•d))、前列康片(阳性对照药)组(给药剂量大鼠1 2g/(kg•d),小鼠2 0g/(kg•d)),然后用前康宁颗粒灌胃。抗炎实验结果表明,前康宁颗粒能显著降低小鼠毛细血管通透性,对抗巴豆油所致的小鼠耳肿胀,抑制角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀,抑制大鼠棉球肉芽肿生成,提示前康宁颗粒的作用机制可能与抗炎有关。[20]
2.1.7 胶囊
王氏等将48只造模大鼠随机分成四组,每组12只,即加味三妙胶囊高剂量组、加味三妙胶囊低剂量组、模型对照组、男康片对照组,并另取8只未造模大鼠为正常对照组。于造模后第7天开始给药。各组每日灌胃给药1次,对照组不予处理,连续灌胃28d。结果:加味三妙胶囊高剂量组与男康片组均有抗炎细胞浸润作用,与模型组相比有极显著差异(P<0 01);两组均能促使前列腺腺泡增多,腺腔内分泌物保持正常,与模型组比较有极显著差异(P<0.01)和显著差异(P<0.05)。但男康片组使纤维组织增生减少作用不明显(P>0.05),而加味三妙胶囊高剂量组能使纤维组织增生减少,与模型组相比有极显著性差异(P<0.01)。[21]
戴氏等用消痔灵制作大鼠前列腺炎病理模型, 分组:A组给予男泌清(6g/kg)灌胃治疗,
B组给予前列康(1.2g/kg)灌胃治疗,C、D组给予生理盐水。1次/d,连续治疗30d。,观察2种药物用药前后大鼠前列腺病理组织学、血浆内皮素、血栓素B2和6 酮 前列腺素F1α以及超氧化物歧化酶(SOD)、IgG、IgA变化。病理学(光镜)观察男泌清胶囊组前列腺少数腺体细胞水肿,排列尚规则。腺腔形态轻度不规则,呈扁平状或折叠状。腔内见少量分泌物,部分腺体轻度萎缩。基质内偶见成堆的血管外红细胞,未见明显的纤维增生和淋巴细胞浸润。前列康片组前列腺腺体细胞水肿明显,腺腔形状不规则,多处可见腺周折叠。腺腔内可见脱落的分泌型上皮细胞,腺体周围见纤维组织增生,血管内红细胞充盈,血管周围淋巴细胞和少量肥大细胞浸润。可见,男泌清胶囊有明显改善实验动物前列腺组织的病理变化,其作用较前列康为好。实验结果:C组血浆内皮素(ET 1)含量较D组明显升高,A组ET 1含量明显较C组低,推测男泌清有保护动物血管内皮细胞而防止纤维组织增生的作用;C组的血栓素B2(TXB2)及与6 酮 前列腺素F1α(6 K)的比值明显升高,A组TXB2及与6 K的比值与C组相比明显降低,证实男泌清消除动物前列腺纤维组织增生等的作用机理,可能与降低TXB2的含量来抑制血小板聚集有关,且效果好于前列康;C组SOD含量亦明显低于D组,而A组SOD含量接近于D组,说明男泌清有较好地保护具有防御体内氧自由基损害的SOD作用;C组IgG、IgA含量降低,A组IgG、IgA含量明显升高,可能与该药中有黄芪益气扶正以提高免疫功能有密切关系,可以看出,具有益气扶正的男泌清保护机体免疫功能的作用明显比前列康强。[22]
. 曾氏等用尿淋胶囊给大鼠灌胃,结果表明:本品对大鼠热板致痛和醋酸的化学致痛有一定
的抑制作用,对葡萄球菌和链球菌有一定的抑制作用,也能减少肉芽组织中羟脯氨酸的含量[23]
贺氏等造模后将30只大鼠随机分为3组,每组10只。模型组:蒸馏水灌胃,3ml/d;紫金胶囊组:紫金胶囊水溶液灌胃,3ml/d(含药0.1g/ml);男康片对照组:男康片溶液灌胃,3ml/d(含药0.1g/ml) 实验结果表明:紫金胶囊对大鼠细菌性前列腺炎模型的病理形态学改变观察,发现其有抑制前列腺腺上皮细胞增生和纤维组织增生的作用,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01),与阳性对照组比较差异有显著性意义(P<0.05),与正常组比较差异无显著性意义(P>0.05)。紫金胶囊能减少小鼠腹腔注射醋酸所致扭体反应次数;降低小鼠腹腔注射醋酸所致毛细血管通透性(P<0.01) 。抑菌试验发现其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌有抑制作用(P<0.01)。[24]
李氏等将造模鼠分3组:摄护宁治疗组、回春通淋丹对照组、模型组。结果:造模鼠前列腺以间质炎为主,腺壁及腺腔亦有浸润,经统计学处理,治疗组和对照组均较模型组为轻(P<0.01), 治疗组比对照组为轻(P<0.01),预防组比模型组2周亦有明显减轻(P<0.01),模型组治疗前后无差异,腺腔、腺壁炎细胞浸润治疗组、对照组均比模型组为轻,但无统计学意义(P>0.05),预防组较2周模型减轻(P<0.05)。纤维组织增生情况见模型组纤维增生较明显,呈轻~中度,治疗组、对照组在数量和程度上均减轻(P<0.01)。免疫学改变:酸性磷酸酶(ACP)、前列腺抗原(PSA)、白介素8(IL-8)用药前后无统计学差异,肿瘤坏死因子(TNF)变化较明显,各模型组均较空白组TNF明显降低(P<0.01),治疗组、对照组与各模型组相比均有提高(P<0.05),预防组亦较2周模型组有明显提高(P<0.01)。说明各用药组TNF均恢复正常。[25]

2.1.8糖浆剂
周氏等用大肠杆菌和消痔灵注射液分别建立了大鼠慢性细菌性前列腺炎和非细菌性前列腺炎病理模型, 将80只大鼠随机分为正常对照组、模型+生理盐水组、模型+泰利必妥组、模型+益前列组,每组20只。结果:模型组动物全部有大肠杆菌;益前列组有大肠杆菌动物明显减少,其抑菌率为60%,作用与泰利必妥相近。益前列、泰利必妥、前列康均能提高前列腺Zn含量,但以益前列为最。益前列组前列腺IgG含量显著降低,其下降程度与泰利必妥组相近,而明显优于前列康组。益前列组腺上皮多呈立方形,炎细胞浸润局限而轻微,间质纤维母细胞增生也很轻,其病理改善程度与泰利必妥组相似。(由虚线状变为粒状)。注入益前列后,其流态均有显著改善。[26]
2.2栓塞    
丁氏等雄性SD大鼠(18只/组),分为八正清淋栓小剂量组(75mg•kg-1)、八正清淋栓大剂量组(150mg•kg-1)、阳性对照组(野菊花栓150mg•kg-1)和阴性对照组(基质75mg•kg-1),造模成功后,分别直肠给药,观察中药八正清淋栓的抑菌和抗炎作用。结果表明:一是对建模大鼠前列腺液中细菌生长的抑制作用,八正清淋栓组细菌菌落数与阴性对照组相比有非常显著差异(P<0.01),与阳性对照组(野菊花栓)相比无显著差异(P>0.05);二是对大鼠前列腺炎炎症反应的疗效,治疗后大鼠前列腺液中的白细胞数明显下降,而卵磷小体显著升高,与阴性对照组相比有非常显著差异(P<0.01);三是对建模大鼠前列腺腺体病理改变的作用,八正清淋栓组前列腺腺体的水肿、出血、坏死、炎细胞浸润等病理改变均明显轻于阴性对照组(P<0.05~0.01),也轻于阳性对照组。[27]
毕氏等将wistar大鼠随机分四组:空白组,模型组,治疗组,对照组。造模成功后,与术后当日用栓剂治疗。治疗组经肛门用蟾蜂消炎栓,每日一次,每次一枚;对照组经肛门用单纯赋形剂栓,每日一次,每次一枚。结果表明:治疗组有11只炎症消失,1只仍有炎症表现,而对照组有10只仍有炎症表现,2只炎症消失。两组间比较差异显著,p< 0.005,说明蟾蜂消炎栓对大鼠细菌性前列腺炎治疗有效。[9]
孙氏等采用细菌性及非细菌性两种大鼠模型,考察该药对前列腺组织炎症反应的影响;采用急性血瘀证动物模型,观察其活血作用;同时进行了一般抗炎、镇痛、体内外抑菌实验。结果:前列腺炎栓可明显抑制前列腺组织炎症反应,恢复前列腺分泌功能;具有很好的抗炎、镇痛、抑菌作用;对血瘀证大鼠血液流变学改变亦有一定改善。[28]
周氏等选择雄性健康大白兔12只,,随机分为A组(实验组)9只,B组(对照组)3只。A组每日肛塞依诺沙星栓(100mg)1支,用缝线缝扎肛门,保留药物8小时。B组兔喂饲依诺沙星粉100mg,每日一次。结果:A组动物前列腺组织水肿消失,上皮及腺组织结构基本完整,B组动物前列腺组织仍可见水肿样改变。前列腺组织新陈代谢旺盛,含有丰富的琥珀酸脱氢酶(SDH)、β-羟化甾体脱氢酶(β-SHDH)和酸性磷酸酶(ACP),结果显示以上3种酶的活性,A组动物明显强于B组动物,说明依诺沙星栓治疗后,前列腺功能恢复较好。[29]
郇氏等采用小鼠肛门给药,以空白、丙酸睾丸素、野菊花栓为对照组,测定首丹王栓对小鼠前列腺指数、网状内皮细胞吞噬指数、腹腔巨噬细胞吞噬指数、耳廓肿胀、肉芽增生、血液微循环及体外抑菌的影响。结果显示:首丹王栓对丙酸睾丸素所致前列腺增生,具有治疗作用,且比野菊花栓明显;能明显增强小鼠网状内皮细胞及腹腔巨噬细胞的吞噬功能,具有显著的免疫调节作用;可抑制二甲苯所致小鼠耳郭肿胀,对急性炎症有明显的抑制作用,可抑制滤纸片埋入所致的肉芽肿增生,对炎症晚期的组织增生和肉芽屏障形成能力,有明显抑制作用,表明具有明显的抗炎作用;能明显增加小鼠耳郭和会阴部微循环灌流量,具有促进局部和全身微循环的作用及较强的体外抑菌作用。[30]
2.3针灸
冀氏等将33只大鼠随即分为3组:正常对照组(3只)、模型组(15只)、针刺组(15只),后两组在各分为3天、6天、9天3个小组,每小组5只 。针刺组取秩边穴针刺,行捻转泻法,每日一次,每次十分钟。模型组造模后经抓取、固定等针刺组过程,但不予针刺处理。正常对照组不做任何处理。实验结果:光镜下针刺后间质水肿消失、炎细胞浸润减轻 或消失,血管仍充血,腺上皮为高立方、高柱状,腺细胞分泌功能加强。三小组比较可知,针刺三天即见明显消炎效果,之后使腺细胞分泌功能呈旺盛趋势。针刺对模型超微结构损伤有保护作用:针刺后,上皮细胞肿胀逆转,胞质内质网致密、清晰、线粒体数量增多而未见肿胀、断嵴和空泡,有各级溶酶体及高度发达的高尔基复合体,分泌小泡及颗粒显著增多。[31]
针刺对免疫系统作用:造模后即刻、3天、6天、9天模型鼠的各项免疫指标均显著低于正常组。针刺组除造模后即刻各项指标均低于正常值外,第3、6、9天均已恢复到正常水平。针刺组于模型组相比,二者与造模后即刻指标均无显著差异;但至第3、6、9天针刺组各指标均明显回升,与模型组差异显著。各小组比较,模型组的各小组间无差异;针刺组的第3、6、9天小组均与即刻组差异显著,而第3、6、9天小组之间无差异。可见,针刺3天后即可使模型组低下的免疫功能恢复到正常,以后的针刺效应便是维持正常水平。另外,针刺能使前列腺组织中过高的血管内皮素含量会降到正常水平。[32]
张氏等通过热刺法对大鼠实验性前列腺炎模型Na+-K+-ATPase活性影响的研究,探讨其能量作用机制。将造模后的大鼠随机分为三组,即治疗组、对照组、模型组。选用次髎穴,一寸毫针取热刺法,对照组予以常规针刺法,模型组和正常组予以同样固定不予针刺。每次十分钟,每组分三、六、十二天三个周期。结果表明,造模后大鼠Na+-K+-AT Pase普遍低下,经治疗后,逐渐恢复正常,显示了针刺治疗作用可能与能量调节作用有关,促进了机体能量的生成。[33]
陈氏等电针“会阳”、“中膂俞” 观察对大鼠非细菌性前列腺炎诱发膀胱功能亢进的尿流动力学的影响。方法:将30只雄性SD大鼠造模成功后, 随机分为假手术组(10只)和模型对照组(10只):不予针刺处理;模型加针刺组(10只):针刺“会阳”、“中膂俞”,其他条件类同。电针“会阳”、“中膂俞”,分别于针刺后3天、10天进行尿流动力学测定。结果:电针“会阳”、“中膂俞”可调整大鼠膀胱尿流动力学指标,降低较高的膀胱内压,使低顺应性膀胱改善,抑制膀胱功能活动亢进(频率、幅度),提高尿流率。说明电针“会阳”、“中膂俞”对大鼠非细菌性前列腺炎所致膀胱尿流动力学异常有一定的改善作用。[34]
三.问题与展望
进行动物试验,研究前列腺炎的发生,为临床用用药提供有效的治疗方案,意义深远。但迄今为止,尚未建立公认的动物模型;诊断和疗效标准不统一;不能体现中医“一病多证”之精华,因此,建立与临床证型相适应的动物模型势在必行。现代科技发展迅速,若能尽快与之接轨,必将使中医药事业进一步发展。

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