动物采血分享 | 如何完成一次采血？也许这些你还不知道

在动物实验中给予动物受试物后，除了观察其外观和表征，还可能需要采集动物的血液等体液进行检测，以进一步观察动物的生理、生化指标的变化，因此采血是动物实验中最常用的操作技术之一。

❖ 全血、血浆、血清的区别 ❖

全血包括血细胞和血浆的所有成分。采集全血时，收集管中必须含有抗凝剂。常用的抗凝剂有：肝素、柠檬酸钠和乙二胺乙酸酸(EDTA)。根据不同研究需要进行选择。

血浆是全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，获得的不含细胞成分的液体。含有纤维蛋白原、凝血因子等。血清是全血未经过抗凝处理，血凝块聚缩释出的液体。其中没有纤维蛋白原和凝血因子。分离血浆和血清的一般方法是：2200-2500rpm 离心至少15分钟。

注意：溶血现象

正常的血清或者血浆样本为黄色清液，而若为偏红，即为有红细胞破裂而产生溶血现象。

避免溶血应注意以下的事项：

1.采血时要避免小鼠毛发、油脂沾染血液导致溶血，所用的容器、注射器必须清洁干燥，不能有水或者有机溶剂。

2.抽血时速度不要太快，速度太快会有气泡产生。如果使用止血带时，止血带不要扎得太久。

3. 抽出的血放入试管时，要先拔掉针头再放血，同时速度不要太快。

4. 收集分离血清的全血时应尽量使血液直接进入小管底部，避免管壁或管盖上的血液在离心过程中导致溶血。

❖ 如何完成一次采血？ ❖

采血技能在临床辅助诊断和监测病情进展等方面是一项非常关键的技术。采血不能简单的看成以静脉穿刺和血液吸入注射器为开始和结束；血样必须安全放置并保证完整，全程精心护理。

1. 仔细计划，选择合适器材

采血需要准备和计划，包括采血量、采血部位、采血方法和采血顺序，确保采血成功。对于脆弱和细小的静脉，需要一个小规格的针头；如果血管大小允许，大规格的针头能为快速、大容量的采血提供最佳血流。采血体积也决定了注射器尺寸。

如何确定采血体积？

实验动物采血时应注意不宜一次采血量过多或采血过于频繁，否则因采血可影响动物健康，造成贫血，甚至死亡。血液采集的可接受量和频率取决于动物的循环血液量。常用实验动物循环血量见下表：

（来源： https://doi.org/10.1002/jat.727 ）

以25g的成年小鼠和250g的成年大鼠为例，通过上表计算可得一只体重为25g的小鼠循环血量约为0.025kg×72mL/kg=1.8mL；一只体重为250g的大鼠循环血量约为64mL/kg×0.25kg=16mL。

由于小鼠体重限制，一次取血后需要一定的恢复期以保证下次血液样本的质量，下表给出了不同采血量对应的恢复期：

（来源： https://doi.org/10.1002/jat.727 ）

综合以上，我们一般采取以下原则进行采血：

（1）单次采血量不超过循环血量的10%。以25g小鼠为例，其单次采血最大值为0.025kg×72mL/kg×10%=0.18ml；

（2）如果实验需要多次采血，每周最大采血体积不超过循环血总体积的7.5%；每两周的最大采血体积不超过循环血总体积的15%。以250g大鼠为例计算其两周内最大采血量为0.25kg×64mL/kg×15%=2.4ml。

（3）仅当动物已安乐死或者在终点期时进行深度麻醉后才可以超过血液采集最大值。

（来源： https://doi.org/10.1002/jat.727 ）

2. 选择合适采血部位

由于采血量的不同，因而采血的部位也不同。

（来源：《实验动物科学》）

此外，上述多数的采血方法是需要麻醉的，麻醉方法也应根据实验需要进行选择。由于很多同学都是做小动物实验的，现在就以大小鼠为例，简单谈谈常见采血方法及特点：

由于不同的采血方法对动物身体的损伤程度和操作方法不尽相同，尽量在满足实验要求的基础上选择简单易行且对动物伤害较小的采血方法。

（1）凡用血量较少的检验如红、白细胞计数，血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。

（2）当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。

（3）如研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、静脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH以及K+、Na+、Cl-离子浓度，必须采取动脉血液。

如果没有特殊要求，大小鼠的终末采血都推荐安乐死或者深度麻醉后心脏采血，这种方式采血比较多，而且不容易污染。

对于小鼠，如果是非终点采血只有一两次，眼眶采血比较适合，采血量比较多，操作也很容易，但是需要麻醉（详细操作点击：大鼠眼眶采血标准操作规程）；间断多次采血，推荐颌下静脉采血或隐静脉采血，这两种采血方法在操作前都不需要麻醉。而且对小鼠的伤害小，采血量与眼眶静脉丛采血法相当，采血后恢复快。

对于大鼠非终点采血，无论单次采血还是多次采血都比较推荐使用注射器进行颈静脉采血，随抓随采。如果不从尾静脉给药的话，尾静脉采血也是非常推荐的方式。

3. 了解具体的采血要求

不同的采样管需要特定检测样本，应事先计划合适抽血顺序，以防止由于试管添加剂污染而产生错误结果。采血时要注意：

①采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在25～28℃，冬季以15～20℃为宜；

②采血用具与采用部位一般需要进行消毒；

③采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；

④若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。

❖ 结论 ❖

采血看似简单，但我们必须周密计划，注意细节，准确可靠，使动物经受最小的应激和伤害。

参考来源：

[1] Guidelines for the survival bleeding of mice and rats.

[2] A good practical guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.（ https://doi.org/10.1002/jat.727 ）

[3] 《实验动物科学》