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请教AAV腺相关病毒动物验证问题

发布于 2021-08-16 · 浏览 1622 · IP 辽宁辽宁
这个帖子发布于 3 年零 262 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

我通过尾静脉注射额方式给予小鼠100ul滴度为1.5*10^12vg/ml病毒原液,过表达3周后取材,mRNA水平可以看到目的基因上调1800倍,但是western并没有上调,使用标签抗体也没有明显上调,各位大神帮我看看到底是哪里出了问题? 我比对了公司病毒插入序列翻译出的氨基酸序列,和我的抗体识别序列完全一致。下面是实验结果。

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这个图是公司构建病毒式插入的序列,红色的部位为我的抗体所能识别的序列。



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这个是做Q-PCR时,内参溶解曲线和cq值。



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这个是目的基因溶解曲线和表达情况,可以看到目的基因表达上调1800倍。



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这个是wb结果,可以看到给予目的基因病毒过表达之后,目的蛋白表达和对照组一致,没有上调。



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这个是用TBG标签抗体做的wb,泳道1、2是对照病毒处理小鼠样本、泳道3、4是目的基因病毒处理小鼠样本,可以看到目的蛋白没有上调,同时在构建病毒时,对照病毒并未插入TBG标签,但在WB验证是,对照组竟然也有条带。

上面这个问题我想了半天,没有想出问题出在哪里,大伙儿帮我看看,跪谢!

最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1622

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