【求助】LentiCRISPRV2载体构建问题

最左边是原质粒，右边四道是酶切的载体

用的DH5α感受态，按照张峰实验团队的说明书链接了好多次连接不上，后来又按科维创生物公司的protocol做的，载体用NEB的BSMBI酶，37℃切开能看到2000bp的条带，切胶回收浓度27ng/ul，载体没有脱磷酸。oligo没有磷酸化，退火后稀释二十倍，然后用的全式金的T4连接酶和NEB buffer2链接还是连不上，没有单菌落长出，阳性对照正常。

求助大家构建出的经验。