实验小白的Northern blot 求救

最近在验证一个蛋白是不是PTGS抑制子，想用Northern检测16C烟草中GFP的RNA表达情况。做了两次实验，结果都是差不多的图，不知道错哪儿了。有没有高手帮我看看

上样量比较少，只有4ug,

转膜24H,loading很明显在膜上，但是不知道RNA是否在？

电泳液用的1X mops，没有加甲醛。

试剂盒用的罗氏的地高辛，标记探针用了1ug模板，过夜标记后，终止反应。直接放-30摄氏度。杂交直接拿来用了，没有100℃再次变性（不知道是不是这个原因，标记的时候100℃变性过了）

预杂交4H，杂交24H 。