多糖结构解析相关知识分享
多糖在生物学上的意义,尤其是在医药学上的重要意义决定了多糖研究的迅速发展,多糖构效关系的演绎成为多糖的热点。但由于多糖结构的复杂性和多样性,其结构测定远远落后于蛋白质和核酸。
目前多糖结构解析的方法包括两种:一类是传统的化学法,一类是波谱学方法。
化学方法一般是对简单的单糖、二糖和寡糖进行分析的经典方法,同时也可以应用在多糖的结构解析上。主要包括:
1. 水解法(酸水解、部分酸水解、乙酰解和甲醇解等。水解后经过中和、过滤用色谱法进行分析。
2. 高碘酸氧化法:判断糖苷键的位置、直链多糖的聚合度和支链多糖的分枝数
3. Smith降解:高碘酸氧化产物还原后进行酸水解或部分水解。主要推断多糖是否具有1→4、1→6、1→2、1→3糖苷键结合的存在。
4. 甲基化反应:判断甲基化多糖是否含有游离的羟基。
波谱学方法一般用于食用菌多糖的结构解析,由于食用菌多糖结构比较复杂,仅用传统的化学方法解析十分困难,必须辅以波谱学知识解析。波普学方法包括:
1. 紫外分光光度计:用苯酚硫酸法(490nm)进行多糖含量测定;280nm处有无吸收峰检测是否含有蛋白质;260nm处有无吸收峰判断是否含有核酸;620nm有无吸收判断是否有色素;在206nm处有无吸收判断是否含有多糖。
2. 红外光谱法:用于分析多糖的构型为α构型还是β构型。
3. 核磁共振法:用一维二维图谱解析结构。
目前多糖结构解析的一般流程为:多糖提取------纯化-------分子量测定------甲基化/高碘酸氧化/Smith降解分析-------紫外/红外分析--------核磁谱图分析-------结合上述所有数据对目标多糖进行结构解析------代谢组学/药代动力学/转录组实验等相关研究。