WB跑！磷酸化蛋白！相关问题

1、跑磷酸化蛋白，封闭液用脱脂牛奶，听说会高背景，但显影结果背景不黑，是不是说明可以用脱脂牛奶封闭呢？

2、若用5%BSA+TBST封闭，封闭液是否可以重复利用，夏天的话可以用几次呢，封闭条件：室温20℃，2h。

3、一抗用5%BSA+TBST稀释，用完的保存条件是4℃还是-20℃呢，反复冻融对抗体的影响大吗，4℃可以吗？一般非磷酸化蛋白我实验室放4℃能保存大于1个月

请各位大佬解惑！！🌹🌹🌹🌹🌹