质粒构建
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最近在构建重组质粒，但是一直不成功，双酶切目的基因（PCR获取）4kb，酶切位点在引物上。双酶切载体质粒5kb，使用的是原始的环状质粒，不是从其他质粒上切下来的那种。然后37℃进行连接2个小时，最后16℃过夜（12h），终止反应，中间都有进行纯化，设置了载体自连对照组，发现自连组长了很多，挑菌后酶切鉴定，全是载体大小的片段，一直挑不到阳性质粒。。。。头秃
，看到有人说原始的环形质粒做载体好像不太容易连接，那应该怎么办呢？
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1340
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