蛋白质测定的问题(GB5009.5-2016中分光光度法),请各位老师解惑
目前在做起始物料酪蛋白中蛋白质及酪蛋白的含量测定,采用GB5009.5-2016中分光光度法测定,遇到一系列问题,求教:
1、我在进行消化过程时,消化液颜色如标准中所写,变为绿色澄清液体后,再消化0.5h,取下放冷,此时消化液颜色一直在褪色,完全放冷后变为澄清无色液体,正常吗?不正常的原因是什么?有时候消化结束后发现还有沉淀(可能是硫酸钾)没有完全溶解,原因是什么(后期加水稀释时就会消失)?消化时会冒烟,是不是消化要等烟完全消失呢?
2、标准中写,“取2.00mL~5.00mL试样或试剂空白消化液于50mL或100mL容量瓶内,加1滴~2滴对硝基苯酚指示剂溶液,摇匀后滴加氢氧化钠溶液中和至黄色,再滴加乙酸溶液至溶液无色,用水稀释至刻度,混匀。”我是采用量取3ml,置50ml量瓶中配制;但是加入指示剂后用氢氧化钠调节颜色时并不明显出现黄色,而是绿色;后来查到对硝基苯酚指示剂变色范围5.6~7.4(无色~黄色),就采用测定pH的方法看颜色变化(后面有图),然后还调节了3种pH做考察;但是结果很差,低pH时,吸光度很大,pH9.18与7.50结果几乎一致。且pH过高或很低时,最后100℃加热,测定液均会出现浑浊的情况。
3、在做消化时有什么需要注意的事项?是不是消化做的不好,导致后面一系列的问题(备注:我用的时国产消化炉,消化时并未出现消化管中溶液有微沸的现象-我理解为一直冒泡)?
图片1:消化时的颜色(放冷后无色澄清)
图片2:调节pH后出现的颜色
备注:另上传我使用的GB5009.5-2016
请各位老师解惑,多谢!~
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3431