生物方向新手疑问求解答！

各位大佬，我目前在做酶的星号活力实验。将引物序列每个点进行突变，并退火成双链，用该酶进行切割，但是最后发现不管孵育多久，跑出来的条带都显示没有切开，酶是NEB公司买的，是肯定有星号活性的，但是我现在验证不出来，不知道问题在哪儿，求大神们解答。